一种细胞外囊泡及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107893050A(43)申请公布日2018.04.10(21)申请号201710966308.5A61P17/00(2006.01)(22)申请日2017.10.17A61P39/06(2006.01)(71)申请人杜水果地址100000北京市石景山区整形医院5栋2门501号(72)发明人赵振民杜水果张辰刘磊(74)专利代理机构北京市京大律师事务所11321代理人李光松(51)Int.Cl.C12N5/077(2010.01)C12N5/074(2010.01)A61K35/35(2015.01)A61K47/46(2006.01)A61P17/02(2006.01)权利要求书1页说明书25页附图5页(54)发明名称一种细胞外囊泡及其制备方法和用途(57)摘要本发明公开了一种细胞外囊泡及其制备方法和用途。其来自于吸脂产生的脂肪组织液和吸出的脂肪组织，包括微泡和外泌体。微泡和外泌体可特异性地递送物质至靶细胞或靶组织，从而改善了疾病的治疗和诊断，其在辅助脂肪组织等移植、在促进伤口、创面愈合、皮肤组织细胞等再生方面具有重要的治疗作用。CN107893050ACN107893050A权利要求书1/1页1.一种细胞外囊泡，其特征在于，其来自于吸脂产生的脂肪组织液和吸出的脂肪组织，包括微泡和外泌体。2.根据权利要求1所述细胞外囊泡，其特征在于，所述脂肪组织液包含吸脂手术开始前注入到脂肪组织内的肿胀麻醉液和吸脂手术器械损伤和负压损伤所致的脂肪组织漏出液和血管漏出的血液；还包含在吸出的脂肪组织液内加的肝素；所述肿胀麻醉液为生理盐水、肾上腺素、利多卡因或碳酸氢钠。3.根据权利要求1所述细胞外囊泡，其特征在于，所述脂肪组织是在肿胀麻醉液的肾上腺素缩血管作用和肿胀液的物理挤压作用后导致的缺血低氧情况下通过负压抽吸到无菌容器里的颗粒脂肪组织。4.权利要求1所述细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括：向脂肪组织液、脂肪组织细胞、或经SV40转入的永生化的脂肪组织细胞、或脂肪样干细胞经重编程转化成iPS细胞、或直接重编程转化成定向干细胞中，添加药物以获得含有所述药物的细胞悬浮液；并且从所述细胞悬浮液中分离负载药物的脱落的微泡和外泌体。5.权利要求1所述细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括：向细胞或转化细胞中添加药物以获得含有所述药物的细胞悬浮液；并且从所述细胞悬浮液中分离微泡。6.权利要求1所述细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括：从脂肪组织液、细胞或转化的细胞培养物中分离脱落的微泡和外泌体；并且将分离的微泡和外泌体悬浮液与药物一起培养。7.根据权利要求4至6中任一项所述细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，所述分离的方法选自密度梯度、超速离心、过滤、透析、自由流电泳中的一种或一种以上。8.权利要求1所述细胞外囊泡的制备方法，其特征在于，包括：从微泡或者脱落的微泡悬浮液中分离负载药物的微泡或脱落的微泡。9.一种药物组合物，其特征在于，包括负载用于治疗或诊断疾病药物的来自脂肪组织细胞的微泡和外泌体。10.根据权利要求9所述药物组合物，其特征在于，所述治疗或诊断疾病的药物选自由抗炎剂、抗氧化剂、抗老化剂、促进细胞血管生长剂、抗肿瘤剂、肽类、蛋白质、核酸中的一种或一种以上。2CN107893050A说明书1/25页一种细胞外囊泡及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种细胞外囊泡及其制备方法和用途。背景技术[0002]肌体的正常生理过程或病理过程是通过细胞与细胞之间的相互联系而发生。肌体组织细胞间的信号传递是通过细胞与细胞的直接接触或者旁分泌而进行。细胞外囊泡(extracellularvesicles,简称Evs)是近20年来发现的一种新的细胞间信号传递介质，这种囊泡是细胞在静息、缺氧和各种应急状态下释放出来的特异性的亚细胞结构群，肌体大部分细胞都具有释放EVS的功能。在细胞条件培养基和生物体的血液、关节液、脑脊液等多种体液中也可以分离出大量的EVS。[0003]细胞外囊泡主要由微泡(microvesicles，MV)和外泌体(exosomes，EXO)组成。微泡是细胞激活、损伤或凋亡后从细胞膜脱落的小囊泡，直径约为100nm-1000nm；细胞微泡(MV)是多种细胞释放在微环境中的质膜囊泡。外泌体(EXO)是细胞经过“内吞-融合-外排”等一系列调控过程形成并可分泌的直径为40-100nm的亚细胞双层膜囊泡。[0004]细胞外囊泡内含有与正常细胞内相同的一些亚细胞器(如线粒体)和细胞内容物(RNA、microRNA、lncRNA、DNA、蛋白质及脂质等)，细胞微泡和外泌体不仅可以保护这些生物活性物质在细胞外环境中不被降解和稀释，也可以促进这