一种用于检测微小残留病灶的组合物及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113403392A(43)申请公布日2021.09.17(21)申请号202110215161.2(22)申请日2021.02.20(71)申请人北京金则医学检验实验室有限公司地址100085北京市昌平区回龙观镇科学园路33号1号楼1层申请人广西金则医学科技发展有限公司(72)发明人付洁宋海峰王清明鱼咏涛张俊领李华柏(51)Int.Cl.C12Q1/6886(2018.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表2页附图1页(54)发明名称一种用于检测微小残留病灶的组合物及试剂盒(57)摘要本发明提供了一种检测BCR/ABL(P210)的引物以及探针，从而建立一种新的超灵敏、检测重复性好的微小残留病检测试剂盒。本发明通过设计针对BCR‑ABL融合基因特异性的引物及探针序列，通过对K562阳性细胞的扩增，其检测灵敏度可以达到10‑6，具有极高的灵敏度。且对确诊为CML的患者不同治疗时期的融合基因BCR‑ABL的拷贝数进行检测，在不同的治疗时期CR1、CR2、CR3，检测的融合基因的拷贝数和治疗的趋势相一致，且和进口的试剂盒的检测一致。其检测过程简单方便、精密度、准确度和特异性高，得以保证检测结果的正确性。CN113403392ACN113403392A权利要求书1/1页1.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括用于扩增BCR‑ABL融合基因的引物，所述引物的序列如SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括探针，所述探针的序列如SEQIDNO：3。3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括用于扩增内参基因的引物和探针。4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述扩增内参基因的引物的序列如SEQIDNO：4和SEQIDNO：5所示。5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述扩增内参基因的探针的序列如SEQIDNO：6所示。6.如权利要求2‑5任一权利要求所述的组合物，其特征在于，所述探针上标记荧光基团。7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、BHQ‑MGB、TAMRA、TET、HEX、ROX。8.一种荧光定量PCR反应体系，其特征在于，所述反应体系包括：引物序列如SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5所示，探针序列如SEQIDNO：3、SEQIDNO：6所示，所述探针标记有荧光基团。9.权利要求1‑7任一权利要求所述的组合物以及权利要求8所述的反应体系在制备检测微小残留病灶试剂中的用途。10.一种检测微小残留病灶的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1‑7任一权利要求所述的组合物，阴性质控以及阳性质控。2CN113403392A说明书1/5页一种用于检测微小残留病灶的组合物及试剂盒技术领域[0001]本发明涉及医学分子诊断领域，具体涉及一种检测微小残留白血病灶的引物、探针及其试剂盒等。背景技术[0002]白血病是一种常见的恶性血液病，且其发病率近年呈上升趋势，严重危害人类健康，我国每年死于白血病的患者在3万人以上，近年来，由于化放疗的进展及造血干细胞移植在临床上的日益广泛应用，急慢性白血病的治疗效果明显改善，大多数病人可达缓解，长期生存病例越来越多，现已知白血病长期缓解甚至治愈的关键是如何控制缓解后的复发问题，由于多数白血病缓解后一段时间进入急性期是由原来的白血病细胞克隆增殖的结果，因此检测微小残留病(nIimalerdsiualdsiease，MRD)对白血病的疗效评价预后判断和复发监测等都有十分重要的意义。[0003]MRD是指白血病患者经过治疗达到完全缓解(包括骨髓移植治疗)后体内残存少量的白血病细胞的状态。临床上只要将白血病细胞总数控制在105个以下，即骨髓中原始或幼稚肿瘤细胞在5％以下，患者的病情即可完全控制而达到临床完全缓解状态(称为CR)，但恶性克隆增殖的潜力可存在于此5％以下的白血病细胞中，微小残留白血病和临床白血病之间没有固定的界限，这主要取决于检测方法的敏感性。因此，MRD的存在是导致白血病缓解后复发急性加重以及影响患者长期存活的主要因素。提高残留白血病细胞检测技术的水平的重要意义在于：(1)指导白血病化疗，根据体内白血病细胞的负荷决定是继续治疗还是停止治疗；(2)在新的水平上选择最适宜的治疗方法；(3)更早地发现药物的耐药；)更早地预测白血病复发；(5)评价自身骨髓移植的净化效果；(6)为体内残留白血病细胞分布和增生动力学的研究提供可能性，所以，为了更深入客观的评价白血病的治疗效果，判断预后，调整缓解后治疗方案，改善