一种检测微小残留病MRD的试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109652518A(43)申请公布日2019.04.19(21)申请号201811550133.0(22)申请日2018.12.18(71)申请人杭州艾沐蒽生物科技有限公司地址310058浙江省杭州市西湖区余杭塘路浙江大学紫金港校区纳米楼231室(72)发明人孙涛余莹莹张天骄(74)专利代理机构北京中政联科专利代理事务所(普通合伙)11489代理人陈超(51)Int.Cl.C12Q1/6869(2018.01)权利要求书2页说明书17页序列表56页附图5页(54)发明名称一种检测微小残留病MRD的试剂盒(57)摘要本发明提供了一种基于高通量测序研发的检测淋系血液癌症(如T/B系白血病、淋巴瘤、骨髓瘤微小残留病)的试剂盒，该试剂盒包括检测IGH(VDJ)、IGH(DJ)、IGK、IGL、TCRβ、TCRγ、TCRδ、BCL1/IGH、BCL2/IGH的带有UMB(UniqueMolecularBarcode,单分子标签)的多重PCR引物组，HouseKeeping基因PCR引物对，MultiplexPCRMix(2X)，内参DNA，Nuclease-FreeWater，ElutionBuffer，以及高通量测序所需的引物和标签序列。采用所述试剂盒，在检测癌细胞的同时可发现新突变的癌细胞，并应用高通量测序技术结合生物信息学分析，MRD的检测灵敏度至少可在100万个细胞中检测到一个癌细胞，即10-6(0.0001％)，不仅可以定量分析癌细胞数量，达到微小残留病检测目的，而且可以纠正PCR扩增产生的碱基错配导致的序列突变和文库测序过程中产生的序列读取错误。CN109652518ACN109652518A权利要求书1/2页1.一种检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，包括建库试剂盒和illuminaindex试剂盒，其中所述建库试剂盒包括分别检测IgH(VDJ)、IgH(DJ)、IgK、IgL、TRB、TRG、TRD、BCL1/IGH、BCL2/IGH的PCR引物组，HouseKeeping基因，以及内参DNA。2.根据权利要求1所述的检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，其中所述检测IgH(VDJ)的PCR引物中，上游引物序列如SEQIDNO:1-16所示，下游引物序列如SEQIDNO:24所示,其中N：A或T或C或G；R：A或G；W：A或T；Y：C或T；S：C或G；B：T或C或G。3.根据权利要求1所述的检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，其中所述检测IgH(DJ)的PCR引物中，上游引物序列如SEQIDNO:17-23所示，下游引物序列如SEQIDNO:24所示,其中N：A或T或C或G；R：A或G；W：A或T；Y：C或T；S：C或G；B：T或C或G。4.根据权利要求1所述的检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，其中检测IgK的PCR引物中，上游引物序列如SEQIDNO:25-34所示，下游引物序列如SEQIDNO:35-37所示,其中N：A或T或C或G；R：A或G；W：A或T；Y：C或T；S：C或G；B：T或C或G。5.根据权利要求1所述的检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，其中检测IgL的PCR引物中，上游引物序列如SEQIDNO:38-54所示，下游引物序列如SEQIDNO:55-57所示,其中N：A或T或C或G；R：A或G；W：A或T；Y：C或T；S：C或G；B：T或C或G。6.根据权利要求1所述的检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，其中检测TRB的PCR引物中，上游引物序列如SEQIDNO:58-88所示，下游引物序列如SEQIDNO:89-100所示,其中N：A或T或C或G；R：A或G；W：A或T；Y：C或T；S：C或G；B：T或C或G。7.根据权利要求1所述的检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，其中检测TRG的PCR引物中，上游引物序列如SEQIDNO:101-106所示，下游引物序列如SEQIDNO:107-109所示,其中N：A或T或C或G；R：A或G；W：A或T；Y：C或T；S：C或G；B：T或C或G。8.根据权利要求1所述的检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，其中检测TRD的PCR引物中，上游引物序列如SEQIDNO:110-112所示，下游引物序列如SEQIDNO:113-116所示,其中N：A或T或C或G；R：A或G；W：A或T；Y：C或T；S：C或G；B：T或C或G。9.根据权利要求1所述的检测微小残留病MRD的试剂盒，其特征在于，其中检测BCL1/IGH的PCR引物中，上游引物序列如SEQIDNO:117所示，下游引物序列如SEQIDNO:118所示,其中N：A或T或C或G；R：A或