用于慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶检测的抗体组合物及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115197322A(43)申请公布日2022.10.18(21)申请号202210860021.5G01N15/14(2006.01)(22)申请日2022.07.21(71)申请人江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院）地址210029江苏省南京市广州路300号(72)发明人吴雨洁陈肖梁金花杨慧赵四书时雨李建勇(74)专利代理机构南京知识律师事务所32207专利代理师高玲玲(51)Int.Cl.C07K16/28(2006.01)G01N33/574(2006.01)G01N33/58(2006.01)G01N33/68(2006.01)C12Q1/02(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图3页(54)发明名称用于慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶检测的抗体组合物及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于慢性淋巴细胞白血病免疫分型治疗后微小残留病灶检测的抗体组合物及其应用，抗体组合物包括一组8种抗体组合。本发明优化抗体组合和对应抗体的荧光标记组合以及结果判读方法，只需要使用一管8种抗体一次上样，既可以全面、高效的对CLL治疗后微小残留病灶(MRD)进行检测，判断CLL的预后和治疗效果，具有极高的敏感性和特异性。CN115197322ACN115197322A权利要求书1/2页1.一种用于慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶检测的抗体组合物，其特征在于由以下抗体组成：抗CD19抗体、抗CD5抗体、抗CD20抗体、抗CD45抗体、抗CD79b抗体、抗ROR1抗体、抗CD43抗体和抗CD81抗体。2.根据权利要求1所述的用于慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶检测的抗体组合物，其特征在于：所述抗体标记不同的荧光标记。3.根据权利要求2所述的用于慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶检测的抗体组合物，其特征在于：所述荧光标记按照抗体抗CD81、抗CD43、抗CD79b、抗CD5、抗CD19、抗CD20、抗ROR1、抗CD45的顺序分别为：FITC、PE、PerCP‑Cy5.5、PE‑Cy7、APC、APC‑A750、BV421和KO。4.一种用于流式细胞术检测慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶的试剂盒，其特征在于包括权利要求1至3任一所述的抗体组合物。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括权利要求3所述的荧光标记。6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括：红细胞裂解液。7.一种权利要求1至3任一所述抗体组合物在制备用于检测慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶的试剂盒中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述检测慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶的过程包括以下步骤：(1)将待测样本加入到流式管中，将细胞浓度调整为5～10x106/mL；所述待测样本为外周血或骨髓液；(2)在流式管中加入权利要求1至3任一所述的已被相应荧光素标记的抗体组合物充分混匀，室温避光孵育15min；(3)向步骤(2)孵育后的流式管中加入1×FACS溶血素，混匀后室温避光静置8～10min；300g离心洗涤5min，弃去上清；(4)向步骤(3)的流式管中加入PBS洗液，300g离心洗涤5min，弃去上清。加入PBS重悬细胞；(5)对步骤(4)中的重悬细胞进行流式细胞上机检测，利用Time/CD45、FSCINT/FSCPEAK和/或FSCINT/SSCINT散点图，圈出液流稳定区间、去除黏连体和细胞碎片；通过CD45联合SSC圈出所有白细胞群，在所有白细胞门中通过CD45/SSC设门圈出淋巴细胞，圈出CD19+B淋巴细胞；通过CD5/CD19双参数图圈出CD5+CD19+细胞；利用CD20/CD79b圈出CD20(‑/dim)CD79b(dim)CD5+CD19+细胞；通过CD43/CD81设门圈出CD20(‑/dim)CD79b(dim)CD5+CD19+CD43(strong+)CD81‑细胞群；通过ROR1/CD19设门圈出ROR1+CD19+细胞群，即为CLL‑MRD细胞；用图中最终确定的CLL细胞数除以白细胞总数，即CLL‑MRD占白细胞百分比。9.一种用于检测慢性淋巴细胞白血病微小残留病灶的装置，其特征在于包括：检测单元和分析单元；所述检测单元包括用于通过流式细胞术检测来自待测个体的样本的试剂材料，用于获得样本的检测结果；所述试剂材料包括权利要求1至3任一项所述的抗体组合物；所述分析单元用于分析检测单元的检测结果。10.根据权利要求9所述的装置，其特征在于：所述通过流式细胞术检测来自待测个体的样本的过程包括：2CN115197322A权利要求书2/2页利用权利要求1至3任一项所述的抗体组合物对待测样本进行处理后制备流式细胞上机样品；进行流式细胞上机检测；其中流式