一种重组腺病毒ADV-lncRNA Gm44275及其构建方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114214290A(43)申请公布日2022.03.22(21)申请号202111611202.6A61K31/7088(2006.01)(22)申请日2021.12.27A61P15/04(2006.01)(71)申请人吉林大学地址130000吉林省长春市朝阳区前进大街2699号(72)发明人周虚李纯锦赵子娇陈璐赵云(74)专利代理机构长春众邦菁华知识产权代理有限公司22214代理人于晓庆(51)Int.Cl.C12N7/01(2006.01)C12N15/861(2006.01)C12N5/10(2006.01)C12N15/64(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表5页附图7页(54)发明名称一种重组腺病毒ADV-lncRNAGm44275及其构建方法和应用(57)摘要一种重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275及其构建方法和应用，涉及诱导分娩领域。该重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275是通过在lncRNAGm44275序列中添加CBHPromoter序列和绿色荧光标签序列构建lncRNA过表达载体，再将lncRNA过表达载体与腺病毒表达载体进行同源重组，经酶切、转染、纯化、浓缩后获得的。该重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275能够应用在制备具有诱导动物分娩功能药品中。本发明能够促进母畜提前分娩，不会影响母体健康，配方更有普适性，对于各种动物皆使用，不会在动物体内造成激素残留，诱导分娩效果更稳定，受个体差异影响更小。CN114214290ACN114214290A权利要求书1/1页1.一种重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275，其特征在于，它是通过在lncRNAGm44275序列中添加CBHPromoter序列和绿色荧光标签序列构建lncRNA过表达载体，再将lncRNA过表达载体与腺病毒表达载体进行同源重组，经酶切、转染、纯化、浓缩后获得的。2.如权利要求1所述的一种重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：利用体外合成技术合成lncRNAGm44275，并在其序列中添加CBHPromoter序列和绿色荧光标签序列，得到lncRNA过表达载体，将lncRNA过表达载体与腺病毒表达载体在体外进行同源重组，得到Gm44275‑CBH‑GFP腺病毒质粒，利用限制性内切酶进行酶切将质粒线性化，将酶切产物转染至HEK293细胞，当细胞出现病态反应并有50％细胞脱落时，裂解细胞收集病毒，经纯化浓缩得到重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述lncRNAGm44275序列见SEQIDNO.1。4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述CBHPromoter序列见SEQIDNO.2。5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述绿色荧光标签序列见SEQIDNO.3。6.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述lncRNA过表达载体序列见SEQIDNO.4。7.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述腺病毒表达载体为pAdenoVecotr载体。8.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述限制性内切酶为PacI。9.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，将lncRNAGm44275替换为lncRNAGm36582。10.如权利要求1所述的一种重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275在制备具有诱导动物分娩功能药品中的应用。2CN114214290A说明书1/5页一种重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275及其构建方法和应用技术领域[0001]本发明涉及诱导分娩技术领域，具体涉及一种重组腺病毒ADV‑lncRNAGm44275及其构建方法和应用。背景技术[0002]诱导分娩是指人为干预导致分娩的发生。在动物生产过程中诱导分娩可以提高繁殖效率，可促使母畜集中产仔，集中分娩有利于种群的管理工作，能够使日常管理简单化、集中化、可控化，既可节约人工成本，也可方便对动物进行健康管理，提高自带成活率，进而提高生产效益，具有重大的经济价值。[0003]目前，针对母畜诱导分娩主要有以下几种方式：[0004](一)母猪诱导分娩[0005]母猪生产过程中常使用前列腺素类似物(如氯前列烯醇、氯前列醇钠等)促进母猪黄体溶解、刺激子宫收缩来诱导母猪分娩。分娩时体内多种激素协同作用共同调节复杂的生理过程，这种激素诱导分娩不当会对母猪和仔猪造成不利影响，若早于妊娠期111d使用前列腺素类似物会增加仔猪的死亡率、降低新生仔猪活力或降低母猪初乳中乳脂含量等。激素类药物的使用同样会根据母猪个体差异如品种、胎次、妊娠期长短等因素影