一种重组卡介苗菌株及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115838732A(43)申请公布日2023.03.24(21)申请号202211337627.7A61K38/19(2006.01)(22)申请日2022.10.28A61P31/06(2006.01)C12R1/32(2006.01)(71)申请人四川大学华西医院地址610000四川省成都市武侯区国学巷37号(72)发明人郭绍华刘杰欧阳江山(74)专利代理机构成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)51222专利代理师张娟全学荣(51)Int.Cl.C12N15/12(2006.01)C12N15/74(2006.01)C12N1/21(2006.01)A61K39/04(2006.01)A61K48/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称一种重组卡介苗菌株及其构建方法和应用(57)摘要本发明涉及一种重组卡介苗菌株rBCG‑CCL2及其构建方法和应用。本发明基于重组ccl2基因构建的重组卡介苗菌株rBCG‑CCL2不仅具有常规BCG接种激活细胞和体液免疫的作用，还可通过分泌有生物学活性的CCL2增强其招募并活化巨噬细胞、T细胞等免疫效应细胞的能力。与常规BCG相比，rBCG‑CCL2高效地诱导免疫应答，提高宿主抗结核天然和特异性的免疫防御功能，促进入侵结核菌的清除，具备实际推广应用价值。CN115838732ACN115838732A权利要求书1/1页1.一种基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种重组质粒，其特征在于：它是包含权利要求1所述基因的质粒。3.根据权利要求2所述的重组质粒，其特征在于：所述质粒为大肠杆菌‑分枝杆菌穿梭质粒载体pMV261。4.一种重组菌，其特征在于：它是包括权利要求1所述基因或者权利要求2‑3所述重组质粒的卡介苗菌株。5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于：所述卡介苗菌株为牛结核分枝杆菌MycobacteriumbovisBCGstr.Pasteur1173P2。6.根据权利要求4或5所述的重组菌，其特征在于：它表达CCL2。7.一种权利要求4～6所述重组菌的构建方法，其特征在于，它包括以下步骤：取权利要求1所述基因，导入质粒，得到重组质粒，再导入卡介苗菌株，即得。8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于：所述质粒为大肠杆菌‑分枝杆菌穿梭质粒载体pMV261。9.权利要求1所述的基因、权利要求2或3所述的重组质粒、权利要求4～6任一项所述的重组菌在制备预防结核的疫苗中的用途。10.一种卡介苗，其特征在于：它是包含权利要求4～6任一项所述重组菌的疫苗。2CN115838732A说明书1/6页一种重组卡介苗菌株及其构建方法和应用技术领域[0001]本发明属于生物制剂技术领域，具体涉及一种重组卡介苗菌株及其构建方法和应用。背景技术[0002]结核病(Tuberculosis)是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,Mtb)引起的一种慢性传染病，被称为细菌性传染病中的“头号杀手”。全球约有四分之一人口感染Mtb。其中10％发展成活动性结核病，造成每年新增结核病患近千万，死亡人数超过百万。卡介苗(BacilleCalmette‑Guérin，BCG)是目前唯一获准的人用结核疫苗，是采用卡介苗菌株制备而成的疫苗。新生儿皮内接种BCG可有效预防儿童粟粒性结核和结核性脑膜炎，降低婴幼儿结核感染的死亡率。但BCG对青少年和成人的保护力较差，导致BCG应用100年来仍不能有效控制结核病的传播。此外，随着耐药结核菌增多，改善BCG疫苗保护能力的需求也日益紧迫。[0003]肺泡巨噬细胞是抵抗Mtb经呼吸道感染的第一道天然细胞免疫防线。肺泡巨噬细胞在Mtb感染和炎症部位的数量和功能与抗结核感染的免疫力密切相关。其数量的增加和功能的增强有助于Mtb的早期和有效的清除。巨噬细胞也是训练免疫的主要效应细胞。由BCG诱导的训练免疫主要通过单核细胞和巨噬细胞响应细胞因子的水平和活性氧和抗菌肽的释放，控制Mtb等病原微生物感染，并通过表观遗传修饰形成天然免疫记忆，发挥长效的天然免疫保护作用。[0004]机体抵抗微生物感染依赖趋化因子介导的免疫细胞在微生物入侵部位的聚集和效应功能的活化。CCL2是单核巨噬细胞等免疫效应细胞的高效趋化因子，在生理性免疫防御中协调细胞的迁移。随着对CCL2的深入研究，发现CCL2还可以影响淋巴细胞的粘附、极化、分泌效应分子、自噬、杀伤和存活。CCL2与受体CCR2结合，上调巨噬细胞和骨髓来源单核细胞表达TNF‑α、IL‑1β、iNOS和IL‑6，促进巨噬细胞的M1极化，有利于对入侵微生物的清除和感染的控制。[0005]CCL2是源