一种重组腺病毒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115595312A(43)申请公布日2023.01.13(21)申请号202110719387.6A61K38/21(2006.01)(22)申请日2021.06.28A61P31/14(2006.01)C12R1/93(2006.01)(71)申请人中国农业大学地址100193北京市海淀区圆明园西路2号(72)发明人刘平黄罗毅(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师钱云(51)Int.Cl.C12N7/01(2006.01)C12N15/20(2006.01)C12N15/24(2006.01)C12N15/861(2006.01)A61K48/00(2006.01)A61K38/20(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表5页附图2页(54)发明名称一种重组腺病毒及其应用(57)摘要本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种重组腺病毒及其应用。本发明将猪干扰素λ3和猪白介素重组至腺病毒的基因序列中并进行分泌表达，得到一种能够在猪体内和肠道组织中高效短暂表达IFN‑λ3和IL‑22的重组腺病毒。本发明提供的重组腺病毒具有良好的安全性以及体内和体外抗猪流行性腹泻病毒的效果，对感染PED仔猪的治愈率达到89％以上，在抗猪肠道冠状病毒感染的领域有重要意义。CN115595312ACN115595312A权利要求书1/1页1.一种重组腺病毒，其特征在于，包括：猪干扰素λ3和猪白介素22的基因序列。2.根据权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于，所述猪干扰素λ3包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；和/或，所述猪白介素22包括如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的重组腺病毒，其特征在于，所述猪干扰素λ3由如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列编码得到；和/或，所述猪白介素22由SEQIDNO.4所示的核苷酸序列编码得到。4.根据权利要求1‑3任一项所述的重组腺病毒，其特征在于，包括：顺序排列的猪干扰素λ3、furin蛋白酶切割位点、F2A元件和猪白介素22；优选地，在猪干扰素λ3和猪白介素22的N还包括信号前导序列；进一步优选地，所述信号前导序列包括如SEQIDNO.5所示的核苷酸序列。5.根据权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于，所述重组腺病毒包括如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。6.权利要求1‑5任一项所述重组腺病毒的制备方法，其特征在于，包括：构建含有猪干扰素λ3和猪白介素22的基因序列的重组腺病毒质粒；使用所述重组腺病毒质粒转染HEK293细胞，培养后获得重组腺病毒。7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1‑5任一项所述重组腺病毒。8.权利要求1‑5任一项所述重组腺病毒在抑制猪肠道冠状病毒中的应用。9.权利要求1‑5任一项所述重组腺病毒在制备抑制猪流行性腹泻病毒的药物中的应用。10.权利要求1‑5任一项所述重组腺病毒在制备治疗猪急性腹泻的药物中的应用。2CN115595312A说明书1/4页一种重组腺病毒及其应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种重组腺病毒及其应用。背景技术[0002]猪肠道冠状病毒(包括α冠状病毒属传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和2017年新出现的猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS‑CoV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV))是引起仔猪腹泻的主要病原，这些猪肠道冠状病毒体内主要感染小肠，可引起新生仔猪急性腹泻，迅速脱水，表现相似的临床症状和病理变化。其中PEDV导致的腹泻占60％以上的新生仔猪腹泻，危害最大，导致高达100％的发病率和死亡率，给现有的养猪业造成重大经济损失。但由于PEDV主要感染肠道，肠道局部黏膜免疫在抗PEDV感染中起着关键作用。尽管市场有针对PEDV的商品化疫苗，但由于商品疫苗诱导黏膜免疫效果较差，且目前的疫苗主要是通过接种母猪由母乳提供仔猪被动保护，因此对仔猪的免疫保护效果并不理想，PEDV引起的新生仔猪腹泻依然时常发生，给现有养猪业带来巨大损失。因此，迫切需要研发一种对PEDV紧急治疗的制剂。[0003]PEDV在体内主要感染猪肠道上皮细胞，肠道黏膜免疫对于机体抵抗PEDV感染至关重要。IL‑10家族细胞因子IFN‑L和IL‑22选择性作用于黏膜上皮细胞，如呼吸道、肠道等。其在黏膜上皮屏障抗感染过程中发挥着重要作用。发明内容[0004]为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种重组腺病毒及其应用。[0005]第一方面，本发明提供重组腺病毒，包括：猪干扰素λ3和猪白介素22的基因序列。[0006]进一步地，所述猪干扰素λ3包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；所述猪白介素22包括如SEQID