一种腺病毒重组狂犬病疫苗及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115820738A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202211033272.2(22)申请日2022.08.26(71)申请人李广虎地址232100安徽省淮南市凤台县城南小区3号楼501(72)发明人李广虎(74)专利代理机构北京知联天下知识产权代理事务所(普通合伙)11594专利代理师张迎新(51)Int.Cl.C12N15/861(2006.01)C12N15/47(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K39/205(2006.01)A61P31/14(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一种腺病毒重组狂犬病疫苗及其制备方法和应用(57)摘要本发明属于疫苗制备领域，特别涉及一种腺病毒重组狂犬病疫苗及其制备方法和应用，所述腺病毒重组狂犬病疫苗包括重组狂犬病腺病毒载体病毒；重组狂犬病腺病毒载体病毒包括人5型腺病毒载体，以及连接在人5型腺病毒载体酶切位点之间的狂犬病毒糖蛋白抗原的编码序列；其中，狂犬病毒糖蛋白抗原由狂犬病病毒ERA株糖蛋白序列的I和/或II和/或Ⅲ号抗原位氨基酸位点进行优化后得到。优化后的抗原产生的抗体滴度更高，与腺病毒进行重组后制成的腺病毒重组狂犬病疫苗可适用于多种作用途径，降低和消除预存免疫对疫苗的影响，对狂犬病产生较强的保护作用，构建的疫苗在胞内表达佐剂，更利于激活免疫通路。CN115820738ACN115820738A权利要求书1/1页1.一种腺病毒重组狂犬病疫苗，其特征在于，包括重组狂犬病腺病毒载体病毒；所述重组狂犬病腺病毒载体病毒包括人5型腺病毒载体，以及连接在所述人5型腺病毒载体酶切位点之间的狂犬病毒糖蛋白抗原的编码序列；其中，所述狂犬病毒糖蛋白抗原的编码序列由狂犬病病毒ERA株糖蛋白序列的I和/或II和/或Ⅲ号抗原位氨基酸位点进行优化后得到。2.根据权利要求1所述的腺病毒重组狂犬病疫苗，其特征在于，所述狂犬病毒糖蛋白抗原的编码序列包括单个氨基酸位点的突变、两个或三个氨基酸位点的突变组合。3.根据权利要求1或2所述的腺病毒重组狂犬病疫苗，其特征在于，所述狂犬病毒糖蛋白抗原的编码序列的氨基酸序列如SEQ1所示。4.根据权利要求3所述的腺病毒重组狂犬病疫苗，其特征在于，所述腺病毒重组狂犬病疫苗还包括佐剂，所述佐剂包括为TRL型佐剂，包括TRL2、TRL3、TRL4和TRL9。5.根据权利要求4所述的腺病毒重组狂犬病疫苗，其特征在于，所述佐剂为TRL3，所述TRL3的核苷酸序列如SEQ2所示。6.一种如权利要求1‑5任一项所述的腺病毒重组狂犬病疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：获取编码狂犬病毒糖蛋白抗原的基因片段；将编码狂犬病毒糖蛋白抗原的基因片段与人5型腺病毒载体重组形成重组腺病毒载体；选择酶切位点线性化重组腺病毒载体，得到线性化产物；将线性化产物进行沉淀后转染HEK293细胞，得到重组狂犬病疫苗腺病毒载体病毒；将所述重组狂犬病疫苗腺病毒载体病毒进行制剂，即得腺病毒重组狂犬病疫苗。7.含有权利要求1或2所述的狂犬病毒糖蛋白抗原的编码序列的腺病毒。8.如权利要求1所述的腺病毒重组狂犬病疫苗在制备预防和/或治疗狂犬病药物中的应用。9.按照权利要求6所述的制备方法制备的腺病毒重组狂犬病疫苗在制备预防和/或治疗狂犬病药物中的应用。10.如权利要求1所述的腺病毒重组狂犬病疫苗或按照权利要求6所述的制备方法制备的腺病毒重组狂犬病疫苗可被制备成滴鼻、皮下注射或肌肉注射剂型的药物。2CN115820738A说明书1/8页一种腺病毒重组狂犬病疫苗及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于疫苗制备领域，特别涉及一种腺病毒重组狂犬病疫苗及其制备方法和应用。背景技术[0002]狂犬病(rabies)是由狂犬病病毒(rabiesvirus，RABV)感染引起的一种高度致死性的人兽共患传染病。RABV共编码5个结构蛋白，分别是核蛋白(nucleoprotein，N)、磷蛋白(phosphoprotein，P)、基质蛋白(matrixprotein，M)、糖蛋白(glycoprotein，G)以及RNA依赖的RNA聚合酶大蛋白(L)，其中RABV糖蛋白(RABVGG)是病毒粒子表面唯一的蛋白，在RABV感染宿主后结合细胞表面的受体帮助入侵，同时也能够刺激机体产生保护性中和抗体(virusGinducedneutralizingantibody，VNA)。[0003]RABVGG上至少存在3个主要中和抗体结合位点：抗原位点Ⅰ～Ⅲ，此外，还有一些次要线性表位。糖蛋白的抗原位点I位于218～240位氨基酸区域，是一个次要线性中和表位，其最小结合区为KLCGVL(226～