检测小细胞肺癌的靶向纳米微泡及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105727320A(43)申请公布日2016.07.06(21)申请号201610067840.9(22)申请日2016.01.30(71)申请人山西大学地址030006山西省太原市小店区坞城路92号(72)发明人王伟王金萍许静梁爱华(74)专利代理机构山西五维专利事务所(有限公司)14105代理人张福增(51)Int.Cl.A61K49/22(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图3页(54)发明名称检测小细胞肺癌的靶向纳米微泡及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种检测小细胞肺癌的靶向纳米微泡及其制备方法和应用。靶向纳米微泡包括脂质双分子外壳和包裹在脂质双分子外壳内部的惰性气体，在脂质双分子外壳上连接有针对小细胞肺癌的抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，纳米微泡平均粒径在300-400nm。制备方法：通过薄膜水化法将二棕榈卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈磷脂酸完全溶解于氯仿中制成脂质体，针对小细胞肺癌的抗前胃泌素释放肽单克隆抗体用巯基乙胺打开，与上述脂质体孵育，形成稳定的硫醚键，然后通入全氟丙烷气体,通过机械震荡的方法获得靶向小细胞肺癌的含有抗前胃泌素释放肽单克隆抗体靶向纳米微泡。该靶向纳米微泡可应用于彩色多普勒超声检测小细胞肺癌。CN105727320ACN105727320A权利要求书1/1页1.一种检测小细胞肺癌的靶向纳米微泡，包括脂质双分子外壳和包裹在脂质双分子外壳内部的惰性气体，特征在于，在脂质双分子外壳上连接有针对小细胞肺癌的抗前胃泌素释放肽单克隆抗体，纳米微泡平均粒径在300-400nm；所述的脂质双分子由二棕榈卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈磷脂酸混合制成；所述的惰性气体为全氟丙烷气体。2.如权利要求1所述的检测小细胞肺癌的靶向纳米微泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)采用薄膜水化法，按质量17-20:2-3:1将二棕榈卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈磷脂酸溶解于氯仿中；在通风橱中待氯仿自然挥发形成磷脂薄膜；在磷脂薄膜中加入体积比PBS：甘油＝9：1的水化液，室温下摇床上水化60min形成脂质体；2)取抗前胃泌素释放肽单克隆抗体用PBS-EDTA稀释；将巯基乙胺溶于PBS-EDTA中；将上述抗体和巯基乙胺溶液混合，37℃孵育90min，用PBS-EDTA溶液超滤3次，超滤条件：3000rpm，8min，4℃，得到单链抗体；3)将单链抗体与脂质体孵育，4℃过夜，次日用PBS溶液超滤洗涤三次，去除没有链接在脂质体上的单链抗体，用PBS溶液重悬，通入全氟丙烷气体(C3F8)、用银汞胶囊调和器机械震荡45s，静置后弃去上层泡沫，所得乳白色悬液即靶向纳米微泡。3.如权利要求1所述的靶向纳米微泡在制备彩色多普勒超声检测小细胞肺癌试剂中的应用。2CN105727320A说明书1/4页检测小细胞肺癌的靶向纳米微泡及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及一种靶向纳米微泡，具体是一种检测小细胞肺癌的靶向纳米微泡的制备方法和应用。背景技术[0002]小细胞肺癌(smallcelllungcancer，SCLC)约占肺癌20％，两年生存率不到5％，在肺癌中恶性度最高，发病原因不明，是一种可产生多种异位激素的神经内分泌肿瘤常规检查X线、CT及MRI对SCLC的诊断缺乏特异性，常在确诊时已到了SCLC的晚期(KalemkerianGP,eta1.Smallcelllungcancer.JNatlComprCancNetw2013，11(1)：78-98.)。[0003]1981年，McDonald等发现SCLC细胞株能够分泌胃泌素释放肽(GRP)并含有GRP受体(McDonaldTJ,eta1.Aqualitativecomparisonofcanineplasmagastroenteropancreatichormoneresponsetobombesinandtheporcinegastrin-releasingpeptide(GRP).RegulPept，1981，2(5)：293-304.)，但其在血液中的半衰期仅两分钟，前胃泌素释放肽(proGRP)与GRP等摩尔分泌，在血液中相对稳定(MiyakeY,eta1.Progastrin-releasingpeptide(31-98)isaspecifictumormarkerinpatientswithsmallcelllungcarcinoma[J].CancerRes，1994，54(8)：2136-2140.)。我们与中国辐射研究院合作,用ProGRP(31-98)作为抗原免疫Balb/c小鼠成功制备并筛选出抗-ProGRP单克隆抗体，并研究了其的纯化及体外对S