一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110398589A(43)申请公布日2019.11.01(21)申请号201910701278.4(22)申请日2019.08.17(71)申请人宁波奥丞生物科技有限公司地址315000浙江省宁波市海曙区望春工业园区春华路885号(72)发明人周义正唐静黄丹娣(74)专利代理机构北京盛凡智荣知识产权代理有限公司11616代理人郑丰平(51)Int.Cl.G01N33/74(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/533(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明公开了一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其检测方法，试剂盒包括NHS磁珠悬浮液、抗缪勒氏管激素单抗I、抗缪勒氏管激素单抗II、偶联缓冲液、封闭液、增强液、清洗液、校准品；本发明将时间分辨荧光免疫分析法的灵敏性、磁分离技术的快速性相结合，检测方法操作简便，检测时间大大缩短，重复性良好，可大面积用于临床检测。CN110398589ACN110398589A权利要求书1/1页1.一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒，其特征在于，包括：NHS磁珠悬浮液、抗缪勒氏管激素单抗I、抗缪勒氏管激素单抗II、偶联缓冲液、封闭液、增强液、清洗液、校准品。2.一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取抗缪勒氏管激素单抗I用偶联缓冲液稀释至浓度≥20ug/mL；(2)取100μL的NHS磁珠悬浮液于反应管中，磁性分离，保留NHS磁珠，弃上清液；加入500μL的偶联缓冲液于反应管中，涡旋15s；磁性分离，保留NHS磁珠，弃上清液；(3)取1mL已稀释的抗缪勒氏管激素单抗I加入到反应管中，涡旋30s，混匀NHS磁珠；将反应管置于旋转混合仪上，室温孵育2h；(4)孵育结束后，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；加入1mL的封闭液于反应管中，涡旋20s，将反应管置于旋转混合仪上，室温孵育1h，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；最后加入1mL的清洗液于反应管中，涡旋20s，磁性分离，弃上清液，保留NHS磁珠；重复上述清洗步骤1次；得到偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠，加入保存液后，4°保存待用；(5)取500μL抗缪勒氏管激素单抗II、200μL的Eu3+-DTPA加入到反应管中，25℃磁力搅拌反应24h，得到Eu3+标记的抗缪勒氏管激素单抗II，将Eu3+标记的抗缪勒氏管激素单抗II用蛋白柱纯化后保存待用；(6)在96孔微孔板中，依次加入偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠、50μL校准品或待测血清、150μLTris-HCL反应缓冲液，25℃振荡孵育5min，静置2min，保留偶联抗缪勒氏管激素单抗I的磁珠，弃上清；用清洗液重复上述清洗步骤5次；再加入200μL的Eu3+标记的抗缪勒氏管激素单抗II，25℃振荡孵育5min；用清洗液重复上述清洗步骤5次；加入200μL增强液，25℃振荡孵育5min；采用时间分辨荧光免疫分析仪进行检测。3.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述偶联缓冲液为浓度0.2M、pH8.3的碳酸钠缓冲液。4.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述清洗液为含有8mmol/LNacl、0.1％BSA、0.2％牛血清白蛋白、0.1mol/L的Tween-80、0.1％NaN3的Tris-HCL缓冲液(50mmol/L、pH7.8)。5.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述封闭液为含1％BSA的PBS缓冲液(0.02M，pH7.4)。6.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述保存液为含5％BSA，10％海藻糖，0.1％Tween-20的Tris-HCl缓冲液(0.05M，pH8.0)。7.根据权利要求2所述的一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述增强液为含0.03％乙酸钠、0.0002～0.0009％β-NTA、0.0024％TOPO、0.08％醋酸、0.1％无水乙醇、0.05％的TritonX-100的水溶液。2CN110398589A说明书1/5页一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其检测方法技术领域[0001]本发明涉及体外诊断领域，具体涉及一种定量检测抗缪勒氏管激素含量的试剂盒及其检测方法。背景技术[0002]抗缪勒氏管激素又称AMH，是早期卵泡的直接产物，由二硫化物桥连接两个72K