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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111579801A(43)申请公布日2020.08.25(21)申请号202010489174.4(22)申请日2020.06.02(71)申请人苏州翊讯生物科技有限公司地址215121江苏省苏州市苏州工业园区唯亭双马街2号星华产业园11号楼(72)发明人蒋金鹏张建新江运强崔小利朱晓东(74)专利代理机构无锡市汇诚永信专利代理事务所(普通合伙)32260代理人王春丽(51)Int.Cl.G01N33/74(2006.01)G01N33/68(2006.01)权利要求书3页说明书10页附图4页(54)发明名称用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明公开了一种抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒及其检测方法,本发明的试剂盒包括至少一根单人份试剂条,单人份试剂条内预置有R1试剂、R2试剂和R3试剂,R1试剂为发光微粒-抗AMH抗体结合物溶液,R1试剂由经过透析的抗AMH抗体和经活化的发光微粒经偶联和封闭后得到,发光微粒经CB缓冲液清洗后离心并超声混匀后加入用CB缓冲液配制的EDAC溶液和NHS溶液,混匀,旋转后活化,R2试剂为生物素-抗AMH抗体结合物溶液,R3试剂为感光微粒-亲和素结合物溶液。本发明的试剂盒对抗缪勒氏管激素的检测结果重复性高,且检测灵敏度高,检测结果可靠。CN111579801ACN111579801A权利要求书1/3页1.一种用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒,其特征在于,包括至少一根单人份试剂条,每根所述单人份试剂条内预置有R1试剂、R2试剂和R3试剂,在每个所述单人份试剂条上设置有若干试剂孔,所述试剂孔包括用于容纳R1试剂的第一试剂孔、用于容纳R2试剂的第二试剂孔、用于容纳R3试剂的第三试剂孔和与激光发生反应的检测孔,所述检测孔采用不透光材料制成,所述试剂孔还包括用于容纳待检测物的样本孔,所述R1试剂为发光微粒-抗AMH抗体结合物溶液,所述R1试剂由经过透析的抗AMH抗体和经活化的发光微粒经偶联和封闭后得到,所述发光微粒按照如下步骤进行活化:将发光微粒经CB缓冲液清洗后离心并超声混匀后加入用CB缓冲液配制的EDAC溶液和NHS溶液,混匀,旋转反应后即完成对发光微粒的活化,所述R1试剂的发光微粒的浓度为10-100μg/ml,所述R2试剂为生物素-抗AMH抗体结合物溶液,所述R3试剂为感光微粒-亲和素结合物溶液,所述R3试剂的感光微粒的浓度为10-100μg/ml。2.根据权利要求1所述的用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒,其特征在于,所述发光微粒的活化方法为,将所述发光微粒利用CB缓冲液清洗后离心,超声混匀用CB缓冲液分别配制EDAC和NHS溶液,并迅速加入清洗后的发光微粒中,混匀,即完成对发光微粒的活化。3.根据权利要求2所述的用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒,其特征在于,所述R1试剂按照如下方法制备:①活化后清洗:将活化完的发光微粒用去离子水离心清洗,离心后用缓冲液重新悬浮;②偶联反应:将经活化的发光微粒及经透析处理的抗AMH抗体按质量比10:0.1-10:0.8混合,充分旋转反应;③封闭:利用甘氨酸溶液对发光微粒进行封闭处理;④清洗:用CB缓冲液清洗步骤③得到的发光微粒-抗AMH抗体结合物;⑤定容:用HEPES缓冲液对发光微粒-抗AMH抗体结合物定容,备用;⑥R1试剂配制:将步骤⑤制备得到的发光微粒-抗AMH抗体结合物溶液加入到HEPES缓冲液中,即配制得到R1试剂。4.根据权利要求1所述的用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒,其特征在于,所述R2试剂按照如下步骤制备:①抗AMH抗体的透析:将抗AMH抗体于CB缓冲液中透析处理,透析完成后使用OD法进行抗体浓度测定;②标记反应:用NaHCO3缓冲液将步骤①透析得到的抗AMH抗体稀释,将生物素溶液加入抗AMH抗体溶液中,旋转反应,即完成标记,生物素与抗AMH抗体的标记比例为20-100个生物素:1个抗AMH抗体;③标记后的透析:用CB缓冲液对步骤②得到的生物素标记的抗AMH抗体进行透析;④浓度测定:收集步骤③得到的抗AMH抗体-生物素结合物溶液,使用OD法进行抗体蛋白浓度测定;⑤R2试剂配制:将步骤③制备得到的抗AMH抗体-生物素结合物溶液加入到PB缓冲液中,即配制得到R2试剂。5.根据权利要求1所述的用于抗缪勒氏管激素含量检测的单人份试剂盒,其特征在于,2CN111579801A权利要求书2/3页所述R3试剂按照如下步骤制备:①亲和素蛋白透析:将亲和素蛋白于CB缓冲液中透析处理,透析完成后使用OD法进行蛋白浓度测定;②感光微粒清洗:将感光微粒用去离子水离心清洗,离心后用HEPES缓冲液重新悬浮;③偶联反应:将步骤②得到的感