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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109490531A(43)申请公布日2019.03.19(21)申请号201811391612.2(22)申请日2018.11.21(71)申请人长沙金域医学检验所有限公司地址410000湖南省长沙市高新开发区麓天路28号金瑞麓谷科技园D1-D2栋1-8层101-801号(72)发明人欧阳伟邓文博李姣(51)Int.Cl.G01N33/535(2006.01)G01N33/74(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法(57)摘要本发明公开一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法,涉及生物检测的技术领域。本发明提供的抗缪勒氏管激素定量检测方法,是通过三步双抗体夹心法酶联免疫进行定量检测,采用生物素-抗体与故乡抗体-抗原复合物结合之后,再与链酶亲和素-辣根过氧化物酶结合物结合,这样抗体-抗原-抗体生物素复合物-SHRP结合在微孔上,通过酶-底物显色反应,酶和底物反应程度由主波长为450nm,参考波长620/630nm的双波长来测定吸光度值,然后根据标准曲线方程计算待测样本的AMH的浓度。本发明提供的检测方法步骤简明,操作简单,使用方便,能准确检测AMH浓度,对检测结果进行定量分析。CN109490531ACN109490531A权利要求书1/2页1.一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)试剂配制:A、AMH校准品B-F和AMH质控品Ⅰ&Ⅱ分别用纯化水溶解,并轻轻振荡充分溶解、混匀后待用;B、洗涤液:用纯化水25倍稀释浓缩洗液;(2)样本处理:A、标记选择使用的微孔条,并依次加入校准品、质控品和待检样本到相应的微孔中;B、每微孔依次加入AMH反应缓冲液、抗AMH-生物素结合物及AMH链霉亲和素-霉结合物分别进行孵育和洗板;(3)显色反应:每微孔加入显色液,室温条件下振荡孵育8-12min;(4)终止反应:每微孔加入终止液,轻敲板壁混合后,用酶标仪读数;(5)结果判断:检测样本的数据使用对数-对数运算,利用立方回归分析模型进行标准曲线及方程确定,并通过曲线方程进行结果计算。2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,在步骤(2)B中微孔内加入AMH反应缓冲液后的孵育过程为:每微孔加入AMH反应缓冲液,转至微孔板摇床上,室温条件下震荡孵育90min,在孵育过程的最后20-30min,准备洗涤液,待孵育完成后洗板。3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,在步骤(2)B中微孔内加入抗AMH-生物素结合物后的孵育过程为:每微孔加入抗AMH-生物素结合物,转至微孔板轨道摇床上,室温条件下振荡孵育30min,洗板。4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,在步骤(2)B中微孔内加入AMH链霉亲和素-霉结合物后的孵育过程为:每微孔加入AMH链霉亲和素-霉结合物,转至微孔板轨道摇床上,室温条件下振荡孵育30min,洗板。5.根据权利要求1-4所述的检测方法,其特征在于,所述洗板的方法为:用全自动洗板机洗板时,自动洗板5次;手动洗板时,则在加入洗涤液后静置5-10s,再手动甩干重复洗板5次。6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述孵育时间随目测颜色变化进行调节,整体颜色偏浅时,可适当延长显色时间。7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,在步骤(4)中,所述酶标仪读数需在10min内完成,且酶标仪读数为450nm、620/630nm双波长读数。8.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,在步骤(5)中,所述对数-对数为lgA-lgNG,其中lgA为检测样本吸光度值以10为底的对数值,lgNG为样本的浓度值以10为底的对数值。9.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,在步骤(5)中,所述结果计算步骤如下:A、先在酶标仪上比色,比出校准品、质控品及样本的吸光度值,然后在酶标仪上直接选择四参数方程,即酶标仪根据读出来的吸光度值以及已知的校准品浓度,绘制出四参数曲线,从而根据样本吸光度值酶标仪直接计算出样本浓度。B、若样本浓度超过18ng/mL,应使用校准品A/样本稀释液进行稀释后重新实验,最后结果乘以稀释倍数;2CN109490531A权利要求书2/2页C、若浓度低于校准品B浓度的样本应如实报告。3CN109490531A说明书1/5页一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法技术领域[0001]本发明属于生物检测技术领域,尤其涉及一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法。背景技术[0002]抗缪勒氏管激素(anti-Mullerianhormone,AMH)是转化生长因子β超家族的成员之一,由ProfessorAlfredJost于1974年首先发现。AMH是由两个相同的70KD