用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条及其制备方法和抗缪勒氏管激素浓度的测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105891490A(43)申请公布日2016.08.24(21)申请号201610207375.4(22)申请日2016.04.05(71)申请人付国亮地址102209北京市昌平区北七家镇宏福创业园23号1号楼623房间(72)发明人付国亮段学军(74)专利代理机构北京国之大铭知识产权代理事务所(普通合伙)11565代理人李卉(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/532(2006.01)G01N33/533(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图2页(54)发明名称用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条及其制备方法和抗缪勒氏管激素浓度的测定方法(57)摘要本发明公开了一种用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条及其制备方法和抗缪勒氏管激素浓度的测定方法，属于生物技术领域；所述的试纸条包括底板，所述的底板上附着有依次排列的样品吸收垫、标记抗体垫、包被膜和吸水垫。本发明的试纸条具有检测结果准确，方便，成本低廉的优点。CN105891490ACN105891490A权利要求书1/2页1.一种用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括底板，所述的底板上附着有沿纵向依次排列的样品吸收垫、标记抗体垫、包被膜和吸水垫。2.根据权利要求1所述的用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条，其特征在于，所述的样品吸收垫、标记抗体垫、包被膜和吸水垫在所述的底板上从左到右依次排列，所述的样品吸收垫、标记抗体垫、包被膜和吸水垫的长度比为13-17:10-12:20-24:24-24。3.根据权利要求1所述的所述的用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条，其特征在于，所述的标记抗体垫包括包被有标记物的第一AMH单克隆抗体。4.根据权利要求3所述的所述的用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条，其特征在于，所述的标记物标记的第一AMH单克隆抗体是荧光标记或胶体金标记的AMH抗体。5.根据权利要求1所述的所述的用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条，其特征在于，所述的包被膜上包被有检测带和质控带，所述检测带固定有第二AMH单克隆抗体，所述的质控线上固定有兔抗鼠IgG抗体。6.根据权利要求1所述的用于定量检测抗缪勒氏管激素的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的包被膜为硝酸纤维素膜。7.一种权利要求1-6任意一项所述的用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条的制备方法，其特征在于，在试纸条的底板上依次固定样品吸收垫、标记抗体垫、包被膜和吸水垫。8.根据权利要求7所述的用于定量检测抗缪勒氏管激素的试纸条的制备方法，其特征在于，所述的包被膜通过如下方法制备而得：使用第一磷酸盐缓冲液分别稀释兔抗小鼠IgG和AMH抗体得到兔抗小鼠IgG溶液和AMH抗体溶液，所述的第一磷酸盐缓冲液浓度为0.01-0.03M，pH值为7.2-7.6，所述的兔抗小鼠IgG溶液和AMH抗体溶液的浓度均为1mg/ml-1.5mg/ml；使用定量喷膜仪以0.8-1.2μl/cm的量将二者以0.5cm-1.0cm的间隔喷于硝酸纤维素膜上，35-38℃烘干0.5-1.5h，加入干燥剂封存备用。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的标记抗体垫由如下方法制备而得：制备AMH抗体溶液：用第一硼酸盐缓冲液将AMH抗体透析得到AMH抗体溶液，所述的第一硼酸盐缓冲液浓度为0.03-0.07M，pH值为8.0-8.5，透析温度为3-5℃，透析时间T≥16h；将所述的AMH抗体溶液浓度调整为1.5-2mg/ml；荧光微球预处理：使用pH4.5-5.0的MES活化缓冲液洗涤荧光微球，加入碳二亚胺和琥珀酰亚胺使二者终浓度均为18-22mmol/L，室温反应10-20min，充分洗涤荧光微球；用浓度为0.03-0.07M的pH值为8.0-8.5的第二硼酸盐缓冲液将预处理过的所述的荧光微球复溶后加入所述AMH抗体溶液中，使所述的AMH抗体与荧光微球的质量比为1-4∶50，室温反应1.5-2.5h，加入第二磷酸盐缓冲液室温封闭20-40min，所述的第二磷酸盐缓冲液中BSA的质量分数为10％，所述的第二磷酸盐缓冲溶液浓度为0.02M，pH值为7.2-7.6；用第三磷酸盐缓冲液保存液复溶至反应前体积，所述的第三磷酸盐缓冲液中按质量百分数计包括0.3-0.7％的BSA和0.2-0.3％的Tween-20，所述的第三磷酸盐缓冲液pH值为7.2-7.6，浓度为0.01-0.03M；使用定量喷膜仪以3-5μl/cm喷涂于玻璃纤维垫上，避光35-38℃烘干1h，加入干燥剂封存备用。10.一种抗缪勒氏管激素浓度的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：标准曲线的绘制：将抗缪勒氏管激素标准品配制成梯