一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111579768A(43)申请公布日2020.08.25(21)申请号201910557543.6(22)申请日2019.06.25(71)申请人山西康健恩生物科技有限公司地址043000山西省临汾市侯马市侯马经济开发区香邑大街医疗健康产业基地4栋1层1号(72)发明人杨轶轩(51)Int.Cl.G01N33/533(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书2页说明书6页(54)发明名称一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明属于生物领域，提供一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒的制备方法，由1)盒体制备、2)检测试纸制备和3)组装三个步骤组成。步骤2)检测试纸制备特别是由步骤2.1NC膜贴膜、2.2包被液的配制、2.3NC膜包被及干燥、2.4荧光标记垫的荧光微球标记和包被、2.5样品吸收垫处理和2.6装配组成。通过本发明的制备方法所得的抗缪勒氏管激素检测试剂盒，其检测限≤0.1ng/mL、准确度测定值与理论值的相对偏差在±10％以内、线性相关系数r≥0.9500、重复性变异系数(CV)不大于5％、200.0IU/L的FSH和200.0IU/L的LH特异性参考品特异性测定结果均≤0.10ng/mL。CN111579768ACN111579768A权利要求书1/2页1.一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒的制备方法，由1)盒体的制备、2)检测试纸的制备和3)组装三个步骤组成；其中2)检测试纸通过以下详细步骤进一步制备：2.1NC膜贴膜：取NC膜和垫板分别裁剪，将NC膜粘贴在PVC垫板上，NC膜应尽量完全覆盖PVC垫板，或者至少NC膜四周边沿与PVC垫板相应四周的边沿的距离差在±1mm内，形成4mm±0.5mm宽的条板；为了达到此效果，也可以采用先大规格NC膜与大规格PVC垫板粘贴，然后在完成后续操作后按照需求裁剪成4mm±0.5mm宽的小块条板的方式进行快速处理；2.2包被液的配制：将普通市售的AMH第二单克隆抗体加入磷酸盐缓冲液，混匀，静置12h得到0.5mg/ml的AMH第二单克隆抗体包被液；将普通市售的兔抗鼠IgG抗体加入磷酸盐缓冲液，混匀，静置12h得到0.3mg/ml的兔抗鼠IgG抗体包被液；2.3NC膜的包被及干燥：在NC膜的中部左侧设置检测线标记，在NC膜的中部右侧设置质控线标记，检测线标记和质控线标记之间的间距为4.5mm；将配置好的AMH第二单克隆抗体包被液使用定量喷膜仪包被在检测线标记处形成检测线，将配置好的兔抗鼠IgG抗体包被液使用定量喷膜仪包被在质控线标记处形成质控线；包被完成后40℃下干燥过夜；2.4荧光标记垫的荧光微球标记和包被制备化学偶合物垫：将1wt％的海藻糖、0.2wt％酪蛋白和0.1wt％tween用TE缓冲液定容至所需体积，搅拌均匀，置入玻璃纤维膜浸泡15分钟，取出45℃干燥得到化学偶合物垫备用；标记：荧光微球加入活化液进行稀释，超声后离心去上清；加入偶联液恢复至原体积，超声分散，加入AMH第一单克隆抗体混合振荡反应，离心去上清；加入封闭液至原体积，超声后继续振荡反应，离心去上清；加入储存液至原体积，超声分散得到荧光微球溶液，2～8℃条件下冷藏备用；包被：将已标记好的荧光微球溶液稀释，通过定量喷膜仪均匀包被在化学偶合物垫上，45℃干燥过夜得到荧光标记垫；2.5样品吸收垫的处理：配置分别含有1.5％BSA和0.51％TritonX-100的0.1M磷酸盐缓冲液，然后将样品垫置入浸泡处理2h，取出并在40℃下干燥得到样品吸收垫；2.6装配：将样品吸收垫粘贴在NC膜的左端，将吸水垫粘贴在NC膜的右端，将已包被并干燥的荧光标记垫粘贴在检测线和样品吸收垫之间，并且样品吸收垫和荧光标记垫相互搭接。2.一种抗缪勒氏管激素检测试剂盒，其特征在于：通过权利要求1所述的制备方法制备获得，其结构组成包括盒体以及位于盒体内的检测试纸。3.根据权利要求2所述的抗缪勒氏管激素检测试剂盒，其特征在于：检测试纸由PVC垫板、NC膜、样品吸收垫、荧光标记垫和吸水垫组成；NC膜粘贴设置在PVC垫板上，样品吸收垫和吸水垫分别粘贴设置在NC膜的两端，样品吸收垫和吸水垫之间的NC膜上设置有检测线T线和质控线C线，检测线T线靠近样品吸收垫设置，质控线C线靠近吸水垫设置；检测线T线和样品吸收垫之间的NC膜上还粘贴设置有荧光标记垫；荧光标记垫与样品吸收垫相互搭接所述荧光标记垫上包被有荧光标记的AMH第一单克隆抗体，所述NC膜的检测线处包被有AMH第二单克隆抗体，所述NC膜的质控线处包被有兔抗鼠IgG抗体。2CN111579768A权利要求书2/2页4.根据权利要求3所述的抗缪勒氏管激素检测试剂盒，其特征在于：盒体的用于装载固定和保护检