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(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103224998A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103224998103224998A(43)申请公布日2013.07.31(21)申请号201310145156.4(22)申请日2013.04.24(71)申请人深圳市生科源技术有限公司地址518000广东省深圳市南山区高新区北区朗山二路5号新奥林厂房二楼222室(72)发明人田仁鹏吴成贡王茵茵卢柳燕(74)专利代理机构深圳中一专利商标事务所44237代理人张全文(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书9页说明书9页序列表3页序列表3页附图3页附图3页(54)发明名称轮状病毒PCR检测试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明适用于生物技术及医学检测领域,提供了一种轮状病毒PCR检测试剂盒及其检测方法。该检测试剂盒包含第一反应液和第二反应液,该第一反应液包含引物对SEQIDNO:1和SEQIDNO:2、探针SEQIDNO:3,引物对SEQIDNO:4和SEQIDNO:5、探针SEQIDNO:6,引物对SEQIDNO:7和SEQIDNO:8、探针SEQIDNO:9,该第二反应液包含逆转录酶和DNA聚合酶。本发明的检测方法利用本发明的检测试剂盒通过PCR反应进行检测。本发明的检测试剂盒可针对A、B、C三组轮状病毒进行同步检测,操作简便,可快速读取结果。CN103224998ACN1032498ACN103224998A权利要求书1/1页1.一种轮状病毒PCR检测试剂盒,包含第一反应液和第二反应液,其中所述第一反应液包含第一引物对SEQIDNO:1和SEQIDNO:2、第一探针SEQIDNO:3,第二引物对SEQIDNO:4和SEQIDNO:5、第二探针SEQIDNO:6,第三引物对SEQIDNO:7和SEQIDNO:8、第三探针SEQIDNO:9,所述第二反应液包含逆转录酶和DNA聚合酶。2.如权利要求1所述的轮状病毒PCR检测试剂盒,其特征在于,所述第一反应液与所述第二反应液通过石蜡分隔开。3.如权利要求1所述的轮状病毒PCR检测试剂盒,其特征在于,所述第一探针SEQIDNO:3、第二探针SEQIDNO:6及第三探针SEQIDNO:9的5’端分别连接有荧光基团,3’端分别连接有淬灭基团。4.如权利要求3所述的轮状病毒PCR检测试剂盒,其特征在于,所述荧光基团为FAM、HEX或ROX,所述淬灭基团为DABCYL。5.如权利要求1所述的轮状病毒PCR检测试剂盒,其特征在于,所述第二反应液还包含显色剂。6.如权利要求1所述的轮状病毒PCR检测试剂盒,其特征在于,所述第二反应液还包含RNA酶抑制剂。7.如权利要求1所述的轮状病毒PCR检测试剂盒,其特征在于,还包含阴性对照和阳性对照。8.如权利要求1所述的轮状病毒PCR检测试剂盒,其特征在于,还包含RNA提取试剂。9.一种轮状病毒检测方法,所述检测方法利用权利要求1-8中任一项所述的检测试剂盒通过PCR反应进行检测。10.如权利要求9所述的轮状病毒检测方法,其特征在于,所述PCR反应条件设定为:42-50℃:10-15min;92-95℃:2-3min;92-95℃:5-10s,55-60℃:40-80s;40个循环。2CN103224998A说明书1/9页轮状病毒PCR检测试剂盒及其检测方法技术领域[0001]本发明属于生物技术及医学检测领域,尤其涉及一种轮状病毒PCR检测试剂盒及其检测方法。背景技术[0002]轮状病毒(Rotavirus,简称RV)属于呼肠孤病毒科轮状病毒属,病毒粒子呈圆形,由形似车轮而得名,为无囊膜病毒,具有11个片断的双股RNA基因组,主要感染儿童和动物,引起婴幼儿严重胃肠炎和脱水性腹泻,新生仔畜的重剧性胃肠炎,在发展中国家每年有60万婴幼儿由于轮状病毒感染引起脱水死亡。根据轮状病毒VP6的抗原性,目前将其分为A~G7个组。其中,A组轮状病毒是秋冬季婴幼儿腹泻的最重要病原,在发展中国家,每年约有87万儿童死于轮状病毒感染;B组轮状病毒由我国洪涛等发现,主要感染青壮年,20年前在我国曾造成大规模暴发性腹泻流行;C组轮状病毒主要感染青少年,并引起散发流行。[0003]因此对轮状病毒的检测显得尤为重要,目前常用的针对轮状病毒的经典检测技术,主要包括电镜技术和分离培养。电镜技术具有快捷、简便的优点,相对于单纯依赖形态学观察的普通负染电镜技术,免疫电镜技术通过在电镜下检测特异的凝集反应或利用特异的抗体标记物检测抗原物质,具有更高的灵敏度和特异性。由于病毒颗粒易于降解常常影响正确诊断,并且电镜设备昂贵,难以普及,故电镜技术的应用大大