一种用于检测鸽轮状病毒A型的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114774584A(43)申请公布日2022.07.22(21)申请号202210385795.7C12R1/93(2006.01)(22)申请日2022.04.13(71)申请人福建省农业科学院畜牧兽医研究所地址350013福建省福州市晋安区新店镇埔垱100号(72)发明人陈翠腾陈珍朱春华刘斌琼蔡国漳张世忠林琳万春和黄瑜江斌(74)专利代理机构福州创蔚来知识产权代理有限公司35290专利代理师郑艳艳(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图2页(54)发明名称一种用于检测鸽轮状病毒A型的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒(57)摘要本发明提供一种用于检测鸽轮状病毒A型的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒，引物序列如SEQIDNO.1‑2所示，具有很高的特异性和灵敏度。建立的方法能够对鸽群中鸽轮状病毒A型感染进行检测，简化操作程序、节约成本。实时荧光定量PCR反应结束后，通过观察其扩增曲线结合Tm值即可直接对结果进行判断。本发明的建立可填补国内外相关领域空白。CN114774584ACN114774584A权利要求书1/1页1.一种用于检测鸽轮状病毒A型的实时荧光定量PCR检测引物，其特征在于：所述引物序列如下：上游引物PiRVAF：5’‑CTACGTTGGCGAAATCTGTATCT‑3’，下游引物PiRVAR：5’‑ACACAGAAACATTTGAGCGTATTG‑3’，目的片段大小为99bp。2.一种含有权利要求1所述引物的鸽轮状病毒A型实时荧光定量PCR检测试剂盒。3.如权利要求1所述的引物在制备鸽轮状病毒A型实时荧光定量PCR检测试剂盒中的应用。2CN114774584A说明书1/5页一种用于检测鸽轮状病毒A型的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒技术领域[0001]本发明属于动物传染病学领域，具体涉及一种用于检测鸽轮状病毒A型的实时荧光定量PCR检测引物。背景技术[0002]人类养鸽历史悠久，鸽经驯化成观赏鸽、赛鸽和肉鸽，拥有较强的免疫系统，加上鸽舍多采用开放式或半开放式，空气流通好，空气新鲜，相比较其他畜禽，鸽生病较少。然而，随着养鸽业规模化、集约化的迅速发展，饲养总量、饲养密度的增加，鸽的饲养方式发生了改变，由于饲养管理水平低，疫病防治意识差，加上鸽的贸易流通频繁(包括信鸽的比赛)，鸽病也越来越多，越来越严重，越来越复杂。近年来鸽病毒性传染病严重威胁着养鸽业，据国内外研究，已经报道的鸽病毒性传染病有鸽新城疫、鸽轮状病毒感染、鸽腺病毒感染、鸽圆环病毒感染、鸽疱疹病毒感染、鸽痘和H9亚型低致病性禽流感等。[0003]轮状病毒(Rotavirus，RV)属于呼肠孤病毒科轮状病毒属，病毒粒子无囊膜，呈正二十面体，分3层壳体，直径约75nm，在电镜下呈车轮状，由此得名。轮状病毒基因组由11节段双链RNA构成，各段长663～3302bp。根据国际病毒分类委员会(InternationalCommitteeonTaxonomyofViruses，ICTV)的最新分类，轮状病毒属包括A～J共10个病毒种。至今轮状病毒A型、D型、F型和G型均能感染禽类，截至目前轮状病毒A型、D型和G型均能感染鸽子。轮状病毒同一病毒种的不同宿主的毒株之间的基因序列往往差异明显。轮状病毒A型(RotavirusA，RVA)一般感染特定种群的动物，此类病毒称为同源株，但偶尔也存在跨种传播现象。轮状病毒A型宿主广泛，广泛存在于哺乳动物和禽类，禽类感染后临床症状主要表现为严重腹泻、脱水、发育不良和死亡率增加。鸽感染轮状病毒A型以呕吐、腹泻、脱水和泄殖腔炎为特征。病鸽在病初精神差，食欲减退，消化功能紊乱。继而萎靡、嗜睡、不食和剧烈腹泻，粪便呈水样，严重脱水，体瘦，贫血，最后因衰竭而死亡。剖检病变主要表现为肝脏坏死和肠道黏膜充血、出血和水肿，另外机体脱水，泄殖腔发炎。轮状病毒A型感染已严重影响了养鸽业的健康发展。[0004]实时荧光定量PCR方法(RealtimePCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质检测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。由于在PCR扩增的指数期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系。实时荧光定量PCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。实时荧光定量PCR技术在检测病原时不仅可以定性检测病原的有无，而且还可以定量分析病毒含量的多少，在病原核酸检测技术上被广泛使用。但是，目前尚未见关于鸽轮状病毒A型TBGreen实时荧光定量PCR检测方法的研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域研究空白。发