医学专题—土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

课题(kètí)2
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题(kètí)背景3、常见(chánɡjiàn)的分解尿素的微生物(异养需氧型)4、课题(kètí)目的1、实例(shílì)：2、实验室中微生物的筛选(shāixuǎn)原理：15.0g〖思考2〗该培养基对微生物（具有(jùyǒu)，不具有(jùyǒu)）选择作用。如果具有(jùyǒu)，其选择机制是。※几种(jǐzhǒnɡ)常见选择培养基1.间接计数法（活菌计数法）
（1）常用(chánɡyònɡ)方法：注意事项:
①为了保证(bǎozhèng)结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度涂布至少3个平板，经涂布，培养计算出菌落平均数。
③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。如何(rúhé)从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？2、显微镜直接(zhíjiē)计数：实例(shílì)分析P22实例(shílì)分析P22设置对照的主要目的(mùdì)是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。小结：通过这个事例可以(kěyǐ)看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。菌落计数实验的具体操作
㈠.土壤取样（微生物的天然培养基）
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样（3-8cm），将样品装入事先准备(zhǔnbèi)好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
㈡.制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备8个灭菌(mièjūn)的试管和1个灭菌的移液管。◆应在火焰旁称取土壤(tǔrǎng)10g。
◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量(shùliàng)，选用的稀释范围相同吗？㈣.取样(qǔyàng)涂布㈤.微生物的培养(péiyǎng)与观察当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数(jìshù)。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。微生物的培养(péiyǎng)与观察（六）鉴定：筛选后必鉴定

鉴别培养基：加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存

酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。
原理：脲酶催化(cuīhuà)尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性三、操作(cāozuò)提示课题成果(chéngguǒ)与评价如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要(xūyào)进一步分析产生差异的原因。1.水中大肠杆菌数目的检测（P26）
伊红美蓝培养基

2.空气中微生物总数的检测
3.牛奶中细菌的分离(fēnlí)与计数
4.土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数相关(xiāngguān)连接：本课题(kètí)知识小结:1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）
A.在液体培养基上进行B.至少接种一种细菌
C.接种一个细菌D.及时补充消耗的营养物质
2.使用选择培养基的目的是（）
A.培养细菌
B.培养真菌
C.使需要的微生物大量繁殖
D.表现某微生物的特定性状与其他(qítā)微生物加以区别
3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()
A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3
C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素4.下列说法不正确的是（）
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶
B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值
C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
D.同其他生物环境相比(xiānɡbǐ)，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）
A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物D.高浓度食盐（09，宁夏，15分）
（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑(kǎolǜ)营养条件外，还要考虑(kǎolǜ)______、______和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_____