医学专题—土壤中分解尿素的细菌的分离和计数.ppt

课题2土壤(tǔrǎng)中分解尿素的细菌的分离和计数课题(kètí)背景课题(kètí)目的：一、如何从土壤中分离(fēnlí)出能够分解尿素的细菌？资料(zīliào)一：启示：寻找目的(mùdì)菌种时要根据它对生存环境的
要求，到相应的环境中去寻找。实验室中微生物的筛选(shāixuǎn)，也是应用同样的原理：即人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。也就是利用选择培养基筛选出你想要的目的菌株。

比如：不加氮源的培养基——固氮菌
不加碳源的培养基——自养微生物
加入高浓度食盐的培养基——金黄色葡萄球菌
以尿素(niàosù)为唯一氮源的培养基——能够分离尿素的细菌思考：
1、该培养基中有哪些成分？它们分别为微生物生长(shēngzhǎng)提供了什么营养？
2、从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上看属于哪类？1、显微镜直接计数法——全部细菌数
利用血球计数(jìshù)板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。

计算方法：
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C—某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，
V—涂布平板时所用的稀释液的体积(tǐjī)(ml)，
M—稀释倍数。注意事项：
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板进行计数(jìshù)。
②设置重复组：为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的培养皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。
③设置对照组：将不加土样的培养基置于相同条件下进行培养，作为空白对照。
④统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

讨论题1：
两位同学用稀释(xīshì)涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释(xīshì)倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。
2、第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。
分析：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？
讨论题2：
在做本课题的实验时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落。但是，其他同学在同样(tóngyàng)的稀释度下只选择出大约50个菌落。
其他同学认为A同学的结果有问题。他们分析可能是A同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。
但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，A同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿了不出令人信服的证据。
分析：你能通过设置对照，帮助A同学学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？通过这个(zhège)事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。三.实验的具体操作
（一）.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封(xìnfēng)中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
（二）.制备培养基
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛肉膏蛋白胨固体培养基。◆应在火焰(huǒyàn)旁称取土壤10g。
◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行思考：
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围(fànwéi)相同吗？（四）.取样(qǔyàng)涂布（五）.微生物的培养(péiyǎng)与观察第二十一页，共三十页。四、结果分析与评价
1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落：
对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长(shēngzhǎng)，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。
2.样品的稀释操作是否成功：
如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。
3.重复组的结果是否一致：
如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，则可能操作有误，需要重做试验。五、操作(cāozuò)提示六.课外延伸

菌种的进一步鉴定：
细菌合成的脲酶将尿素(niàosù)分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高。那么我们就可以在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂变红，说明该细菌能够分解尿素。滤膜法：
测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤(guòlǜ)器过滤(guòlǜ)后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上