医学专题—土壤中分解尿素的细菌的分离与计数定稿.ppt

课题2
土壤(tǔrǎng)中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题(kètí)背景4、课题(kètí)目的一.研究(yánjiū)思路1、实例(shílì)：2、实验室中微生物的筛选(shāixuǎn)原理：15.0g②在此培养基中哪些(nǎxiē)作为碳源、氮源？6、怎样证明(zhèngmíng)此培养基具有选择性呢？6、怎样证明(zhèngmíng)此培养基具有选择性呢？1、显微镜直接(zhíjiē)计数：2.间接计数法（活菌计数法）
⑴原理(yuánlǐ)：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。

⑵常用方法：稀释涂布平板法。注意事项
①为了保证结果准确(zhǔnquè)，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果(jiēguǒ)的影响，提高实验结果(jiēguǒ)的可信度。实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌
落数目的实验时，A同学从对应的106
倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌
落，但是其他同学在同样的稀释度下
只选择出大约50个菌落(jūnluò)。分析其原因。小结：通过这个事例可以看出(kànchū)，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。二.实验的具体操作
㈠.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌(mièjūn)。
㈡.制备培养基：
制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。◆应在火焰旁称取土壤10g。
◆在稀释(xīshì)土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行㈣.取样(qǔyàng)涂布㈣.取样(qǔyàng)涂布㈤.微生物的培养(péiyǎng)与观察◆如果得到了2个或2个以上(yǐshàng)菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。微生物的培养(péiyǎng)与观察三.结果分析与评价
1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。
2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算(jìsuàn)每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。四、操作(cāozuò)提示五.课外延伸

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够(nénggòu)分解尿素。大肠杆菌(dàchánɡɡǎnjūn)呈黑色中心,有或无金属光泽本课题(kètí)知识小结:六、例题(lìtí)解析1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）
A.在液体培养基上进行B.至少接种一种细菌
C.接种一个(yīɡè)细菌D.及时补充消耗的营养物质
2.使用选择培养基的目的是（）
A.培养细菌
B.培养真菌
C.使需要的微生物大量繁殖
D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别
3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()
A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3
C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素4.下列说法不正确的是（）
A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶
B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值
C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度
D.同其他生物环境相比(xiānɡbǐ)，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）
A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物D.高浓度食盐练一练用稀释涂布平板法来统计(tǒngjì)样品中活菌的数目，其结果与实际值相比（）A.比实际值高B.比实际值低C.和实际值一致D.比实际值可能高也可能低下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()
A.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水
B.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、琼脂、水
C.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、尿素、琼脂、水
D.KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、牛肉(niúròu)膏、蛋白胨、琼脂、水
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第三十四页，共三十六页。下课(xiàkè)了内容(nèiróng