抗人CD4人鼠嵌合抗体基因的构建及其在真核细胞中的瞬时表达的任务书.docx

抗人CD4人鼠嵌合抗体基因的构建及其在真核细胞中的瞬时表达的任务书
任务书
一、研究背景
免疫治疗是一种新兴的治疗方式，在免疫治疗中，嵌合抗体概念显得十分重要。嵌合抗体是把人源抗体的Fc部位与小鼠源抗体的变异区嵌合，以产生一种具有双重抗原特异性的重组抗体。这种抗体结合了小鼠与人的优点：小鼠能够快速产生高亲和力的特异性抗体，而人类则具有较好的兼容性和免疫原性低的Fc区。因此，嵌合抗体可以在人体内保持较长时间，达到治疗目的。
在该研究中，我们将对抗人CD4人鼠嵌合抗体基因的构建及其在真核细胞中的瞬时表达进行探究。
二、研究目的
1.构建抗人CD4人鼠嵌合抗体基因并验证其正确性。
2.利用真核细胞表达系统，进一步研究嵌合抗体的表达水平和特异性，为后续的治疗研究奠定基础。
三、研究内容
1.基因合成和克隆
根据人源抗体和小鼠抗体序列，设计一份含有正确靶标（抗人CD4）的人鼠嵌合抗体基因序列。利用基因合成技术构建合成基因，并将基因放入真核表达载体中以供后续的转染实验使用。将载体进行克隆并检测正确性。
2.转染操作和细胞的培养
将嵌合抗体表达载体转染到真核细胞株中，如CHO或HEK293等，进行细胞培养，并在试管内进行实时表达量的监测。选择符合要求的细胞株，进行批量细胞培养和抗体表达。
3.抗体的提取和纯化
通过sulfitolysated的方法收集并纯化细胞的培养液以获取目标抗体，并通过SDS-PAGE电泳和WesternBlotting检验目标蛋白质的表达和净化效果。
4.嵌合抗体的特异性试验
通过ELISA等方法对嵌合抗体的特异性进行检验。
四、研究意义
本研究旨在构建出抗人CD4人鼠嵌合抗体基因，并通过真核细胞表达系统的研究探究嵌合抗体表达水平和特异性。这对于后续的抗肿瘤和自身免疫疾病治疗研究具有重要的参考价值和意义。
五、进度安排
1.第一周：查阅相关文献，设计人鼠嵌合抗体基因序列。
2.第二周：基因合成和克隆。
3.第三周：细胞的培养和转染操作。
4.第四周：实时监测嵌合抗体表达水平。
5.第五周：存储和纯化嵌合抗体。
6.第六周：特异性试验。
7.第七周：撰写实验报告。
六、预期结果
1.成功合成出抗人CD4人鼠嵌合抗体基因，并验证其正确性。
2.在真核表达系统中，获得嵌合抗体的表达水平和特异性。
3.为后续治疗研究打下基础。
七、参考文献
1.Lee,C.H.,&Romain,G.(2018).Cancerimmunotherapy:currentstatusandfutureperspectives.ChineseJournalofCancer,37(1),4.
2.Feagan,B.G.,McDonald,J.W.,&Panaccione,R.(2018).MethotrexateincombinationwithinfliximabisnomoreeffectivethaninfliximabaloneinpatientswithCrohn'sdisease.Gastroenterology,155(6),1788-1789.