双顺反子表达载体及其构建方法与应用.pdf
听容****55
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双顺反子表达载体及其构建方法与应用.pdf
本发明提供了一种双顺反子表达载体及其构建方法与应用,具体是一种用来高效、稳定转染二氢叶酸还原酶营养缺陷型突变CHO细胞株(CHO/dhfr‑)的双顺反子表达载体,其是在pIRES质粒上分别插入S100a6启动子、目的基因和dhfr基因构建而成。本发明通过使用低温诱导型启动子和构建双顺反子载体,弱化dhfr基因的表达,使目的基因仅仅通过两或三轮的加压筛选,在低浓度MTX下获得足够的拷贝数,同时利用诱导启动子的性质,在生产过程中降低温度,最大限度增加重组蛋白的产量。
一种双顺反子翻译偶联表达载体及其应用.pdf
本发明公开了一种双顺反子翻译偶联表达载体,所述表达载体在pET‑28a(+)质粒上插入分子伴侣、新的核糖体结合位点和目的蛋白基因,构建成双顺反子翻译偶联表达载体。进一步地,本发明构建了基因工程菌,其为以E.coliBL21(DE3)为表达宿主,利用双顺反子翻译偶联表达载体,实现贻贝蛋白Mgfp‑3B与分子伴侣SUMO和/或TrxA的共表达,促进Mgfp‑3B正确折叠翻译从而以可溶性形式表达。本发明实现了在大肠杆菌中简便快捷地生产具有生物活性的可溶性贻贝蛋白,并且双顺反子表达载体避免了融合表达造成的酶切分
一种双载体表达体系及其构建方法与应用.pdf
本发明属于基因工程和发酵工程领域,具体涉及一种快捷构建酶制剂高产菌株的方法及其专用载体。本发明构建了辅助载体pUB‑toxic和整合表达载体pUB‑Exp。克隆目的基因入pUB‑Exp后获得重组表达质粒pUB‑Enz,然后将辅助载体pUB‑toxic和重组表达质粒pUB‑Enz先后转入宿主细胞中,再通过提高培养温度、诱导剂和高浓度适宜抗生素,诱使辅助载体pUB‑toxic丢失和pUB‑Enz整合入宿主细胞基因组中并进行基因扩增,再经过平板等筛选获得目标酶制剂的高产菌株。利用本发明提供的方法,可方便快捷地获
大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用.pdf
本发明公开了一种大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用,属于基因工程技术领域。本发明解决了现有大肠杆菌载体在基因表达过程中表达效率低,从而导致其应用于色氨酸生产中色氨酸产率低的问题。所述大肠杆菌表达载体含有一个在大肠杆菌中具有功能的人工合成启动子序列、一段供外源基因插入表达的多克隆位点序列、一个人工转录终止序列、一个可以在大肠杆菌中进行基因克隆表达的抗性筛选标记。所述大肠杆菌表达载体可以实现基因的高效转录与翻译。本发明的大肠杆菌表达载体适用于色氨酸的生产。
TrPPA基因及其克隆、表达载体构建方法和应用.pdf
本发明公开了提供一种能够提高白花三叶草生长过程中对低温、高温、盐胁迫和干旱的抗逆能力,同时可以提高其生物量的TrPPA基因。该TrPPA基因的cDNA全长序列如序列表1所示。通过荧光定量PCR验证了TrPPA在低温,高温,盐胁迫、干旱胁迫下的表达模式,结果表明该基因在低温,高温,盐胁迫、干旱胁迫下,TrPPA基因在根与叶中的表达量均发生了显著的变化,各胁迫条件及时间点下有所差异,能够有效提高白花三叶草生长过程中对低温、高温、盐胁迫和干旱的抗逆能力,将TrPPA基因通过基因工程的手段转入到拟南芥中,转基因植