用于构建BRCA1/2基因变异检测文库的自动化试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110029103A(43)申请公布日2019.07.19(21)申请号201910366839.X(22)申请日2019.04.30(71)申请人上海思路迪生物医学科技有限公司地址201114上海市闵行区新骏环路158号2幢304室、404室、402室(72)发明人陈俊李夏静陈才夫李福根许青熊磊(74)专利代理机构中科专利商标代理有限责任公司11021代理人张国梁(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)C40B50/06(2006.01)权利要求书1页说明书17页附图5页(54)发明名称用于构建BRCA1/2基因变异检测文库的自动化试剂盒(57)摘要本发明涉及用于构建BRCA1/2基因变异检测文库的自动化试剂盒。本发明提供一种用于BRCA1/2基因的扩增子文库构建试剂盒，所述试剂盒包含：1)用于进行第一轮PCR扩增的第一引物，2)用于进行第二轮PCR扩增的第二引物，3)第三引物和第四引物，其用于以第二轮PCR扩增产物为模板进行第三轮PCR扩增，构建目的基因的扩增子文库，其中第一引物和第二引物为BRCA1/2基因的特异性引物，其中上述1)、2)和3)分别置于分开的容器中。本发明的试剂盒自动化构建扩增子文库，显著降低了操作的繁琐程度和对检测样本的需求量，提高了测序数据的整体质量。CN110029103ACN110029103A权利要求书1/1页1.一种用于BRCA1/2基因的扩增子文库构建试剂盒，所述试剂盒包含：1)用于进行第一轮PCR扩增的第一引物，2)用于进行第二轮PCR扩增的第二引物，3)第三引物和第四引物，其用于以第二轮PCR扩增产物为模板进行第三轮PCR扩增，构建目的基因的扩增子文库，其中第一引物和第二引物为BRCA1/2基因的特异性引物，其中上述1)、2)和3)分别置于分开的容器中。2.权利要求1所述的试剂盒，其中第一引物和/或第二引物的量适合将第一轮PCR扩增和/或第二轮PCR扩增进行5个以下循环，例如进行5、4、3、2、1个循环。3.权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其中第一引物和第二引物分别为正向引物和反向引物，或分别为反向引物和正向引物。4.权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其中第一引物和第二引物除包含靶向BRCA1/2基因的特异性序列外，还包含接头和/或index序列。5.权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包含以下一项或多项：4)纯化装置，例如磁珠，其用于第一轮PCR扩增、第二轮PCR扩增和/或第三轮PCR扩增产物的纯化，5)纯化试剂，如乙醇或PEG，其用于第一轮PCR扩增、第二轮PCR扩增和/或第三轮PCR扩增产物的纯化，6)封闭试剂，例如矿物油，其用于对PCR混合物进行热封闭，7)清洗试剂，例如水，其用于清洗移液器，8)洗脱试剂，例如水，其用于从纯化装置洗脱吸附物，其中4)、5)、6)、7)和/或8)分别置于分开的容器中，或将相同试剂置于同一容器中。6.权利要求1-5任一项所述的试剂盒，其包含一个或多个反应容器，用于进行PCR反应。7.权利要求1-6任一项所述的试剂盒，其中所述第一轮PCR、第二轮PCR和/或第三轮PCR在同一容器中进行。8.权利要求1-7任一项所述的试剂盒，其还包含废液容器，用于收集废液。9.权利要求1-8任一项所述的试剂盒，其包含PCR混合物，其中所述PCR混合物与1)、2)和3)置于相同容器中或置于分开的容器中。10.权利要求1-9任一项所述的试剂盒，其中所述容器分开制造，然后组装到卡盒中，或其中一个或多个容器形成在基板上，例如所述容器为基板上的孔，优选所述容器置于同一个卡盒或形成于同一个基板中，例如同一个封闭的卡盒或封闭的基板中。2CN110029103A说明书1/17页用于构建BRCA1/2基因变异检测文库的自动化试剂盒技术领域[0001]本发明涉及用于基因检测文库构建的自动化试剂盒。具体而言，本发明涉及用于构建BRCA1/2基因变异检测文库的自动化试剂盒。背景技术[0002]耗资30亿美元历时10余年完成的人类基因组计划(HumanGenomeProject，HGP)给基因组学研究带来了天翻地覆的变化，通过测定人类基因组DNA的序列，探寻基因在染色体上的位置，明确基因的结构和功能，解读人类的全部遗传信息，人类第一次在分子水平上全面认识自我。新一代测序技术催生了丰富多彩的基因组图谱。[0003]新一代测序技术又称大规模平行测序(massivelyparallelsequencing，MPS)，是指采用“边合成边测序”的原理、对于几十万到几百万DNA分子同时进行平行的测序反应，然后通过生物信息学分析所得到的原始图像数据或电化学信号、