一种用于产气肠杆菌检测的实时荧光定量PCR试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号CN108866215B(45)授权公告日2022.02.08(21)申请号201810737814.1(56)对比文件CN1013(22)申请日2018.07.0607316A,2008.11.19CN102952880A,2013.03.06(65)同一申请的已公布的文献号CN1824805A,2006.08.30申请公布号CN108866215ACN103415203A,2013.11.27(43)申请公布日2018.11.23WO2014003997A1,2014.01.03(66)本国优先权数据WO2009075565A1,2009.06.18201711252384.62017.12.01CNUS20150126382A1,2015.05.07JP2016533752A,2016.11.04(73)专利权人苏州百源基因技术有限公司王怡倩等.建立检测产气肠杆菌的TaqMan荧地址215163江苏省苏州市高新区锦峰路8光定量PCR和普通PCR方法.《疾病监测》.2016,第号1号楼40931卷(第2期),第153-158页.(72)发明人车团结徐红陈游沈颂东Diene,S.M.等.Enterobacteraerogenes李亚鹏高恺EA1509Ecompletegenome.《Genbank》.2015,(74)专利代理机构兰州中科华西专利代理有限AccessionNo.FO203355.1.公司62002章喜明等.CAD基因原核表达载体的构建及代理人李艳华表达产物的活性鉴定.《现代临床医学生物工程学杂志》.2006,第12卷(第4期),第362-365页.(51)Int.Cl.M.L.Mohedano等.ControllingtheC12Q1/689(2018.01)formationofbiogenicaminesinfermentedC12Q1/686(2018.01)foods.《AdvancesinFermentedFoodsandC12Q1/10(2006.01)Beverages》.2015,第273-310页.C12N15/11(2006.01)C12R1/01(2006.01)审查员陈婧莘权利要求书1页说明书9页序列表2页附图4页(54)发明名称一种用于产气肠杆菌检测的实时荧光定量PCR试剂盒(57)摘要本发明涉及一种用于产气肠杆菌检测的实时荧光定量PCR试剂盒，包括PCR反应液、酶混合液、产气肠杆菌Cad基因标准品、阴性对照品和阳性对照品。本发明通过提取产气肠杆菌的基因组DNA，结合实时荧光定量PCR检测技术，可达到准确定量待测标本中产气肠杆菌含量的目的，具有快速、灵敏、特异性好的特点，对判断产气肠杆菌活性菌的含量以及后续研究泌尿道感染具有重CN108866215B要意义。CN108866215B权利要求书1/1页1.一种用于产气肠杆菌检测的实时荧光定量PCR试剂盒，包括PCR反应液，由12mMTris‑HCl、100mMKCl、0.12%TritonX‑100、0.12%胆酸钠、0.6mg/mLBSA、1.8mMMgCl2、50nMdNTP、500nM上游引物、500nM下游引物、300nMTaqman探针组成；其中上游引物序列为5'‑CGCTGTACGCTTCATCTATT‑3'；下游引物序列为5'‑GACGCTGTATGCCGAGGTT‑3'；探针序列为5'‑TTCCCTTTGCCTAACATATCTACCGTTT‑3'；酶混合液，由5U/µLTaqDNA聚合酶，50%甘油，20mMTris‑HCl，100mMKCl，0.1mMEDTA，1mMDTT，0.5%Tween®20和0.5%NP‑40组成；产气肠杆菌Cad基因标准品，由1.00×108copies/ml、1.00×107copies/ml、1.00×106copies/ml、1.00×105copies/ml的重组质粒组成；其中Cad基因标准品序列为5'‑CGCTGTACGCTTCATCTATTTTCCCTTTGCCTAACATATCTACCGTTTTTATCTGGTAGAAAATCGCCATATCTTTAATGCCGGGCATTTTACCTACTTTTTCAACCTCGGCATACAGCGTC‑3'；阴性对照品，由水组成；阳性对照品，由1.00×107copies/ml的重组质粒组成。2.如权利要求1所述的一种用于产气肠杆菌检测的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述探针中5'端标记的荧光报告基团为FAM、TET、JOE、HEX、VIC中的一种，3'端标记的荧光淬灭基团为BHQ、DABCYL、TAMRA中的一种。2CN108866215B说明书1/9页一种用