2019109597129一种用于检测布鲁氏菌的引物组合,试剂盒和PSR方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN110628924A
(43)申请公布日2019.12.31
(21)申请号201910959712.9C12N15/11(2006.01)

(22)申请日2019.10.10

(71)申请人中国检验检疫科学研究院
地址100000北京市大兴区亦庄经济技术
开发区荣华南路11号
(72)发明人王静刘威慈颖林楠张乔
张晓龙孙筱霞杨燕
(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理
事务所(特殊普通合伙)
11465
代理人崔自京
(51)Int.Cl.
C12Q1/689(2018.01)
C12Q1/6844(2018.01)
C12Q1/04(2006.01)权利要求书1页说明书6页
序列表1页附图2页
(54)发明名称
一种用于检测布鲁氏菌的引物组合、试剂盒
和PSR方法
(57)摘要
本发明公开了一种用于检测布鲁氏菌的引
物组合、试剂盒和PSR方法，属于生物检测技术领
域。本发明用引物组合对待测样品进行PSR反应，
检测PSR反应产物，确定待测样品是否含有布鲁
氏菌。本发明的PSR方法操作简便，反应时间短，
灵敏度高，特异性强。
CN110628924A
CN110628924A权利要求书1/1页

1.一种用于检测布鲁氏菌的引物组合，其特征在于，具体引物序列如下：
FP：5’-AGGCGCAAATCTTCCACCTTGCGCCTATTGGGCCTATAACGG-3’；SEQIDNO.1；
BP：5’-AGGCGCAAATCTTCCACCTTGAAATTCAGGTCTGCGACCGAT-3’；SEQIDNO.2；
IB：5’-CGTAAGGATGCAAACATCAA-3’；SEQIDNO.3；
IF：5’-CCTTGCCATCATAAAGGCC-3’；SEQIDNO.4。
2.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括裂解液、2×PSR反应
缓冲液、双指示系统和阳性对照。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液为含5％Chelex-100，1％
TritonX-100的TE缓冲液。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述2×PSR反应缓冲液含有下列组分：

pH8.8Tris-HCl，20mmol；KCl，50mmol；MgSO4，8mmol；(NH4)2SO4，10mmol；Tween20，0.1％；
Betaine，0.8mol。
6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述双指示系统包括显色液和/或荧光
染料；所述显色液包括0.08mM甲酚红和0.02mM苯酚红；所述荧光染料为1×水溶液的
EveGreen。
7.一种用于检测布鲁氏菌的PSR方法，其特征在于，包括如下步骤：用权利要求1所述的
引物组合对待测样品进行PSR反应，检测PSR反应产物，确定待测样品是否为布鲁氏菌。
8.根据权利要求7所述的一种用于检测布鲁氏菌的PSR方法，其特征在于，所述PSR反应
体系如下：3.6μL模板DNA，12.5μL2×PSR反应缓冲液，2.4μL引物混合液，3.5μLdNTPs，1.0
μLBstDNA聚合酶，1.0μL显色液/荧光染料，以双蒸水补至25μL；
所述引物混合液包括50μmol/L的FP和BP各0.8μL，50μmol/L的IB和IF各0.4μL；
所述dNTPs的终浓度为1.4mmol/L/种；
所述BstDNA聚合酶的终浓度为8U。
9.根据权利要求7所述的一种用于检测布鲁氏菌的PSR方法，其特征在于，所述PSR反应
的反应条件为65℃，40min。
10.根据权利要求7所述的一种用于检测布鲁氏菌的PSR方法，其特征在于，所述检测
PSR反应产物通过双指示系统确定待测样品是否为布鲁氏菌的方法如下：
(1)显色法，扩增反应后，若待检样品反应管液体呈黄色，表示检出布鲁氏菌核酸，该样
品检测结果为初筛阳性；若待检样品反应管液体呈粉红色，表示未检出布鲁氏菌核酸，检测
结果为阴性；
或(2)荧光法，在荧光定量仪中进行扩增反应：阳性反应的表现为，在反应阶段出现S型
扩增曲线，且溶解曲线为单一峰；阴性反应的表现为，在反应阶段无扩增曲线，且溶解曲线
无峰出现；结果判定标准：在阳性对照发生阳性反应且阴性对照发生阴性反应的前提下，待
检样品在反应阶段出现S型扩增曲线，且溶解曲线为单一峰，并与阳性对照单一峰位置接
近，此时待检样品判断为阳性，否则为阴性；如果阳性待检样品发生了阴性反应，或者阴性
待检样品发生了阳性反应，应重新检测。

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CN110628924A说明书1/6页

一种用于检测布鲁氏菌的引物组合、试剂盒和PSR方法

技术领域
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