一种CYFRA21-1测定试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112014575A(43)申请公布日2020.12.01(21)申请号202010915193.9G01N33/58(2006.01)(22)申请日2020.09.03(71)申请人武汉生之源生物科技股份有限公司地址430000湖北省武汉市东湖开发区高新大道818号高科医疗器械园B11号1楼、2楼、3楼(72)发明人潘鑫来祥兵(74)专利代理机构北京众达德权知识产权代理有限公司11570代理人江慧(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/574(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/535(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一种CYFRA21-1测定试剂盒及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种CYFRA21‑1测定试剂盒及其制备方法，将氯甲基磁珠包被CYFRA21‑1捕获抗体，获得磁珠包被抗体复合物，将所述磁珠包被抗体复合物使用磁珠稀释液稀释后获得试剂M；将CYFRA21‑1检测抗体使用还原剂溶液处理，获得活化后的抗体；碱性磷酸酶用酶活化剂活化，获得活化后的碱性磷酸酶；将所述活化后的抗体与所述活化后的碱性磷酸酶反应，获得酶标抗体复合物；将所述酶标抗体复合物使用酶标稀释液稀释后获得试剂R。本发明通过用氯甲基磁珠一步法包被捕获抗体，用还原剂处理断开检测抗体重链间二硫键后用碱性磷酸酶标记的方法来提高化学发光法检测CYFRA21‑1的线性范围和准确性。CN112014575ACN112014575A权利要求书1/1页1.一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将氯甲基磁珠包被CYFRA21-1捕获抗体，获得磁珠包被抗体复合物，将所述磁珠包被抗体复合物使用磁珠稀释液稀释后获得磁珠试剂M；将CYFRA21-1检测抗体使用还原剂溶液处理，获得活化后的抗体；将碱性磷酸酶用酶活化剂活化，获得活化后的碱性磷酸酶；将所述活化后的抗体与所述活化后的碱性磷酸酶反应，获得酶标抗体复合物；将所述酶标抗体复合物使用酶标稀释液稀释后获得试剂R。2.根据权利要求1所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述还原剂配方为：10～100mMPBS，10～100mMDTT；所述CYFRA21-1检测抗体质量与所述还原剂溶液质体积的比值为(0.5～1)mg：1mL。3.根据权利要求1所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述酶活化剂的配方为：10～100mMTris，0.2～0.6％NaCl，2～10mMEDTA，10～50mMSMCC交联剂；所述碱性磷酸酶质量与所述酶活化剂体积的比值为(0.5～1)mg：0.5mL。4.根据权利要求1所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述活化后的碱性磷酸酶与所述抗CYFRA21-1检测抗体的质量比为(0.5-0.8):1；所述酶标稀释液的配方为：20～100mM的Tris，0.5～0.9％NaCl，1～5mMMgCl2，0.1～0.5mMZnCl2，0.05～0.15％PC-300，1～5％甘油，0.1～1％BSA，5～10％胎牛血清，pH为6～7。5.根据权利要求1所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述磁珠稀释液的配方为：20～100mMPBS，0.1～0.3％Tween20，0.1～1％BSA，0.05～0.3％PC-300，pH为7.0～8.0。6.根据权利要求1所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述氯甲基磁珠质量和所述CYFRA21-1捕获抗体质量的比值为1:(0.02-0.1)。7.根据权利要求1所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述将氯甲基磁珠包被CYFRA21-1捕获抗体，获得磁珠包被抗体复合物，具体包括：将氯甲基磁珠、CYFRA21-1捕获抗体和偶联缓冲液直接进行偶联反应，偶联后进行封闭，加入保存液后获得磁珠包被抗体复合物。8.根据权利要求7所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述偶联缓冲液包括磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液和硼酸缓冲液中的一种或多种。9.根据权利要求7所述的一种CYFRA21-1测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述封闭缓冲液的配方为50～100mMPBS，0.5～1.5％BSA，pH7.0～7.5。10.一种采用权利要求1-9任一所述的方法制备得到的CYFRA21-1测定试剂盒。2CN112014575A说明书1/7页一种CYFRA21-1测定试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，