一种RNA pulldown的回收试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112251490A(43)申请公布日2021.01.22(21)申请号202010980295.9(22)申请日2020.09.17(71)申请人上海泽恒生物科技有限公司地址200082上海市杨浦区平凉路2103号56幢520室(72)发明人苏小平苏乐恒(74)专利代理机构北京艾皮专利代理有限公司11777代理人冯铁惠(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12Q1/6886(2018.01)C12Q1/6883(2018.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/574(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图4页(54)发明名称一种RNApulldown的回收试剂盒及其应用(57)摘要本发明适用于生物医学技术领域，提供了一种RNApulldown的回收试剂盒及其应用，该回收试剂盒包括回收磁珠、清洗液、洗脱液、细胞裂解液和细胞交联液；所述细胞裂解液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠、乙基苯基聚乙二醇、氯化镁、氯化钠；所述细胞交联液为多聚甲醛溶液。本发明提供的回收试剂盒，具有操作简单、回收周期短、回收效率高等特点，其能够显著降低非特异背景回收，缩短回收时间，提高基因检测的准确度，进而有效解决了传统RNA技术回收操作复杂、回收周期长，回收背景高的问题。CN112251490ACN112251490A权利要求书1/2页1.一种RNApulldown的回收试剂盒，包括回收磁珠、清洗液和洗脱液，其特征在于，还包括：细胞裂解液；所述细胞裂解液包括以下按照摩尔浓度或质量百分比浓度计的组分：三羟甲基氨基甲烷1～1000mmol/L、十二烷基硫酸钠0.1％～10％、乙基苯基聚乙二醇0.1％～10％、氯化镁1～1000mmol/L、氯化钠1～1000mmol/L；以及细胞交联液；所述细胞交联液为多聚甲醛溶液，其质量浓度为0.1％～10％。2.根据权利要求1所述的一种RNApulldown的回收试剂盒，其特征在于，所述清洗液包括：清洗液A；所述清洗液A包括以下按照摩尔浓度计的组分：三羟甲基氨基甲烷1～1000mmol/L、乙二胺四乙酸1～1000mmol/L、氯化钠1～5000mmol/L；以及清洗液B；所述清洗液B包括以下按照摩尔浓度或质量百分比浓度计的组分：三羟甲基氨基甲烷1～1000mmol/L、十二烷基硫酸钠0.1％～10％、乙二胺四乙酸1～1000mmol/L、氯化钠1～5000mmol/L。3.根据权利要求1所述的一种RNApulldown的回收试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括RNA洗脱液、DNA洗脱液和蛋白质洗脱液中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的一种RNApulldown的回收试剂盒，其特征在于，所述RNA洗脱液包括以下按照摩尔浓度或质量百分比浓度计的组分：三羟甲基氨基甲烷1～1000mmol/L、十二烷基硫酸钠0.1％～10％、乙基苯基聚乙二醇0.1％～10％、氯化镁1～1000mmol/L、氯化钠1～1000mmol/L；所述DNA洗脱液包括以下按照摩尔浓度或质量百分比浓度计的组分：三羟甲基氨基甲烷1～1000mmol/L、十二烷基硫酸钠0.1％～10％、氯化镁1～1000mmol/L、氯化钠1～1000mmol/L；所述蛋白质洗脱液包括以下按照摩尔浓度或质量百分比浓度计的组分：三羟甲基氨基甲烷1～1000mmol/L、氯化钠1～1000mmol/L、乙基苯基聚乙二醇0.1％～10％、脱氧胆酸钠0.1％～10％、十二烷基硫酸钠0.1％～10％、乙二胺四乙酸1～1000mmol/L。5.根据权利要求1所述的一种RNApulldown的回收试剂盒，其特征在于，所述回收磁珠为亲和磁珠。6.一种如权利要求1～5中任一项所述的回收试剂盒在RNA与细胞分子相互作用中的应用。7.根据权利要求6所述的一种应用，其特征在于，所述细胞分子为RNA、DNA和蛋白质中的任一种。8.根据权利要求7所述的一种应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：对细胞进行培养后，再用所述细胞交联液进行固定，并添加甘氨酸溶液中和所述细胞交联液；将固定后的细胞与所述细胞裂解液进行混合后，再经超声和离心处理，得到样品；将所述回收磁珠与所述细胞裂解液进行混合，得到磁珠悬浮液；往样品中添加探针后，再与磁珠悬浮液进行混合，并置于磁力架进行分离，得到沉淀物；用所述清洗液对沉淀物进行洗涤；2CN112251490A权利要求书2/2页将洗涤后的沉淀物与所述洗脱液进行混合后，再添加或不添加蛋白酶，并置于磁力架进行分离，收集上清液；对上清液中的细胞分子进行提纯。9.一种如权利要求1～5中任一项所述的回收试剂盒在制备用于治疗和/或预防疾病的试剂盒中的应用