一种RNA核酸释放剂及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108823201A(43)申请公布日2018.11.16(21)申请号201810755890.5(22)申请日2018.07.11(71)申请人广州海力特生物科技有限公司地址510000广东省广州市广州高新技术产业开发区科学城开源大道11号A7栋二层(72)发明人周荣华林若琳彭春梅邓可基张晓玮李家导张嘉乐小炎罗园香李海茵石壮壮张新杨芬邢兰坤陈观芝(74)专利代理机构北京精金石知识产权代理有限公司11470代理人张黎(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种RNA核酸释放剂及其应用(57)摘要本发明公开了一种RNA核酸释放剂及其用应用，该RNA核酸释放剂含有摩尔浓度为0.35-50mM的多果定、体积份数为1-10％的聚乙二醇辛基苄基醚(TritonX-100)、体积份数为1-10％的乙基苄基聚乙二醇(NP-40)、体积份数为0.1-10％的Chelex-100树脂和摩尔浓度为1-200mM的醋酸钾，本发明以多果定代替胍盐或尿素，用于水煮法RNA提取，简化了RNA提取物在PCR之前的纯化过程，与使用胍盐或尿素进行RNA水煮法提取的方法相比较，使用该RNA核酸释放剂对RNA进行提取后扩增，在相同条件下，能够获得更好的扩增效果，降低了对初始检测样品中RNA浓度的要求。CN108823201ACN108823201A权利要求书1/1页1.一种RNA核酸释放剂，其特征在于，含有摩尔浓度为0.35-50mM的多果定、体积份数为1-10％的聚乙二醇辛基苄基醚(TritonX-100)、体积份数为1-10％的乙基苄基聚乙二醇(NP-40)、体积份数为0.1-10％的Chelex-100树脂和摩尔浓度为1-200mM的醋酸钾。2.根据权利要求1所述的RNA核酸释放剂，其特征在于，含有摩尔浓度为1-40mM的多果定、体积份数为1-8％的聚乙二醇辛基苄基醚(TritonX-100)、体积份数为3-9％的乙基苄基聚乙二醇(NP-40)、体积份数为0.5-8％的Chelex-100树脂和摩尔浓度为5-150mM的醋酸钾。3.根据权利要求1所述的RNA核酸释放剂，其特征在于，含有摩尔浓度为5-35mM的多果定、体积份数为2-5％的聚乙二醇辛基苄基醚(TritonX-100)、体积份数为5-8％的乙基苄基聚乙二醇(NP-40)、体积份数为2-6％的Chelex-100树脂和摩尔浓度为30-100mM的醋酸钾。4.根据权利要求1所述的RNA核酸释放剂，其特征在于，含有摩尔浓度为10-30mM的多果定、体积份数为3-5％的聚乙二醇辛基苄基醚(TritonX-100)、体积份数为6-8％的乙基苄基聚乙二醇(NP-40)、体积份数为3-5％的Chelex-100树脂和摩尔浓度为40-90mM的醋酸钾。5.一种使用权利要求1所述的RNA核酸释放剂对RNA进行提取的方法。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，用来提取细胞中的RNA。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，用来提取病毒中的RNA。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括将含有待提取RNA的样品和RNA核酸释放剂的混合液进行水煮的步骤。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的水煮温度为100℃。10.一种RNA提取试剂盒，其特征在于：所述的RNA提取试剂盒包含权利要求1-4任意一项所述的RNA核酸释放剂。2CN108823201A说明书1/5页一种RNA核酸释放剂及其应用技术领域[0001]本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种RNA核酸释放剂及其在水煮法提取RNA中的应用。背景技术[0002]自1869年Miescher发现核酸以来，涉及到核酸研究的分子生物学实验成为了最常见的实验之一。而核酸提取是研究核酸的重要手段。经过近150年的探索研究，已有多种核酸提取的方法被报道。核酸提取主要包括DNA提取和RNA提取。[0003]关于DNA的提取，最经典的方法为碱裂解法提取质粒DNA。该方法提取的DNA纯度好，得率高，合适大部分分子生物学实验。但是，该方法提取过程繁琐，耗时较长，需要用到苯酚氯仿等毒害性较高的化学试剂。为了改进碱裂解法中出现的弱点，有大量的研究根据不同的分子生物学实验，针对性开发出更加简便高效的核酸提取方法。比如目前提取DNA通常采用水煮法，通过水煮10-20分钟裂解样品，利用乙二胺四乙酸(EDTA)、Chelex-100树脂等螯合剂螯合掉样品裂解后所释放的干扰后续PCR反应的金属离子，从而得到可用于PCR反应的DNA。水煮法具有简便、易操作、核酸提取率高等特点，广泛应用于疾控、法医等领域。[0004]关于RNA的提取，由于R