检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113891944A(43)申请公布日2022.01.04(21)申请号202180001625.8C12Q1/6848(2018.01)(22)申请日2021.06.24C12N15/11(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2021.11.19(86)PCT国际申请的申请数据PCT/CN2021/1021342021.06.24(71)申请人黄婉秋地址201210上海市浦东新区创新西路300弄23号1401室申请人黄健(72)发明人黄婉秋黄健(74)专利代理机构上海序伦律师事务所31276代理人周东萍(51)Int.Cl.权利要求书2页说明书15页C12Q1/70(2006.01)序列表3页附图4页(54)发明名称检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，所述试剂盒包含以RT‑巢式RPA检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的引物对，及以RT‑巢式RPA检测内参基因的引物对，所述检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的引物对与检测内参基因的引物对在同一反应管中同时进行检测反应。本发明的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，实现同管检测病原体目的基因和内参基因的RNA水平，增加内参基因对实验过程的质量控制，避免假阴性结果。而且本发明实施例检测新冠病毒的试剂盒最低可检测到1拷贝/uL的SARS‑CoV‑2病毒RNA片段，具有超高灵敏度，为新冠病毒SARS‑CoV‑2的早期发现、早期隔离、早期治疗提供新的技术支撑，具有非常好的应用前景。CN113891944ACN113891944A权利要求书1/2页1.一种检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含以RT‑巢式RPA检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的引物对，及以RT‑巢式RPA检测内参基因RNA的引物对，所述检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的引物对与检测内参基因RNA的引物对在同一反应管中同时进行检测反应。2.根据权利要求1所述的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述病原体RNA包括病毒、细菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体、真菌、或寄生虫的RNA，所述动物或人类基因RNA包括人类肿瘤相关基因mRNA以及遗传病相关基因mRNA。3.根据权利要求2所述的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述病原体为SARS‑CoV‑2新冠病毒。4.根据权利要求3所述的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述以RT‑巢式RPA检测SARS‑CoV‑2新冠病毒RNA的引物对是针对SEQIDNO：1所示SARS‑CoV‑2新冠病毒N基因序列或其部分序列设计的引物对。5.根据权利要求4所述的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述以RT‑巢式RPA检测SARS‑CoV‑2新冠病毒的引物对包括：SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示序列的外引物对，SEQIDNO：5和SEQIDNO：6所示序列的内引物对。6.根据权利要求3所述的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述内参基因为人类管家基因RP基因。7.根据权利要求6所述的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述以巢式RPA检测RP基因的引物对包括：SEQIDNO：9和SEQIDNO：10所示序列的外引物对，SEQIDNO：11和SEQIDNO：12所示序列的内引物对。8.根据权利要求3所述的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含特异性针对SEQIDNO：1所示SARS‑CoV‑2新冠病毒N基因序列或其部分序列设计的探针。9.根据权利要求6所述的检测病原体RNA、及动物或人类基因RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含特异性针对SEQIDNO：7所示RP基因序列或其部分序列设计的探针。10.一种检测SARS‑CoV‑2新冠病毒的引物对，其特征在于，所述引物对是以RT‑巢式RPA检测SARS‑CoV‑2新冠病毒N基因的引物对，其包含外引物对和内引物对。11.根据权利要求10所述的检测SARS‑CoV‑2新冠病毒的引物对，其特征在于，所述引物对是针对SEQIDNO：1所示SARS‑CoV‑2新冠病毒N基因序列或其部分序列设计的引物对，所述外引物对具有如SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示的碱基序列，所述内引物对具有如SEQIDNO：5和SEQIDNO：6所示的碱基序列。12.一种检测SARS‑CoV‑