一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112375139A(43)申请公布日2021.02.19(21)申请号202011359387.1(22)申请日2020.11.27(71)申请人苏州星资生物科技有限公司地址215400江苏省苏州市太仓市北京西路6号科技创业园孵化西楼6楼(72)发明人韩金志张寒陈帅徐改变(74)专利代理机构北京成实知识产权代理有限公司11724代理人张焱(51)Int.Cl.C07K14/79(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)A23C9/152(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用(57)摘要本发明涉及一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用，包括以下步骤：S1：将奶山羊的羊乳汁放入离心机，去除上层脂肪和下层沉淀，取中间层清液，用HCL将其PH调至4.5‑4.7左右，再放入离心机；S2：将乳清与缓冲液于容器中混勾，并在磁力搅拌器上边搅拌边缓慢加入硫酸铵固体，至硫酸铵饱和度为80％，用氨水将溶液调至7.0，搅拌后保留沉淀物；S3：将用超纯水溶解后的沉淀物加入到容器，并加入缓冲液，用磁力搅拌器搅拌透析液，并用氯化钡检测透析液中透析出来的硫酸根离子。本发明的一种重组乳铁蛋白的制备方法能够从奶山羊的乳汁中提取重组乳铁蛋白，扩大了重组乳铁蛋白的提取来源；此外，提取步骤简单、高校，有效降低了重组乳铁蛋白的提取成本。CN112375139ACN112375139A权利要求书1/1页1.一种重组乳铁蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将奶山羊的羊乳汁放入离心机，去除上层脂肪和下层沉淀，取中间层清液，用HCL将其PH调至4.5-4.7左右，再放入离心机，除去酪蛋白沉淀，取上层乳清；S2：将乳清与缓冲液于容器中混勾，并在磁力搅拌器上边搅拌边缓慢加入硫酸铵固体，至硫酸铵饱和度为80％，用氨水将溶液调至7.0，搅拌后保留沉淀物，并用超纯水将沉淀物溶解；S3：将用超纯水溶解后的沉淀物加入到容器，并加入缓冲液，用磁力搅拌器搅拌透析液，并用氯化钡检测透析液中透析出来的硫酸根离子，直至将硫酸铵全部透析出来。2.根据权利要求1所述的重组乳铁蛋白的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述离心机温度设定为5℃，转速为9000rpm，PH为4.6。3.根据权利要求2所述的重组乳铁蛋白的制备方法，其特征在于，步骤S2中，搅拌时间为30分钟，温度为5℃，搅拌转速为9000rpm。4.根据权利要求3所述的重组乳铁蛋白的制备方法，其特征在于，步骤S3中，搅拌的时间为20小时。5.根据权利要求4所述的重组乳铁蛋白的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为PBS缓冲液。6.根据权利要求5所述的重组乳铁蛋白的制备方法，其特征在于，PBS缓冲液包括NaCl和KCl。7.一种基于权利要求1所述的重组乳铁蛋白在婴幼儿奶制品中的应用，所述重组乳铁蛋白有利于铁元素的吸收，降低铁离子对婴幼儿肠道的刺激。2CN112375139A说明书1/2页一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用技术领域[0001]本发明涉及乳铁蛋白生产技术领域，特别涉及一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用。背景技术[0002]乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白，因其生物活性功能广泛，已被应用于医药开发、食品加工、保健品生产等领域。目前，国内外市场上销售的乳铁蛋白及其相关产品主要从牛乳中分离纯化所得。因其来源的限制，天然乳铁蛋白的产量己经无法满足人们日益增长的需求。因此，利用转基因技术生产重组乳铁蛋白作为天然乳铁蛋白的替代品，己经成为研宄和开发乳铁蛋白的主要途径。但目前市场上销售的乳铁蛋白主要从牛乳中提取，而面对庞大的消费市场，单从牛乳中分离纯化乳铁蛋白已无法满足市场需求。研究表明，重组乳铁蛋白表达产物可以从转基因羊乳汁中提取，提取获得的和浓缩的转基因乳清抑菌试验显示均有抑菌活性。因此，如何高效、低成本的从转基因羊乳汁中提取重组乳铁蛋白成为亟待解决的问题。发明内容[0003]本发明为了解决现有技术的问题，提供了一种能够降低生产成本，提升生产效率的重组乳铁蛋白的制备方法。[0004]具体技术方案如下：一种重组乳铁蛋白的制备方法，包括以下步骤：[0005]S1：将奶山羊的羊乳汁放入离心机，去除上层脂肪和下层沉淀，取中间层清液，用的HCL将其PH调至4.5-4.7左右，再放入离心机，除去酪蛋白沉淀，取上层乳清；[0006]S2：将乳清与缓冲液于容器中混勾，并在磁力搅拌器上边搅拌边缓慢加入硫酸铵固体，至硫酸铵饱和度为80％，用氨水将溶液调至7.0，搅拌后保留沉淀物，并用超纯水将沉淀物溶解；[0007]S3：将用超纯水溶解后的沉淀物加入到容器，并加入缓冲液