肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113607939A(43)申请公布日2021.11.05(21)申请号202110896911.7(22)申请日2021.08.05(71)申请人艾美探索者生命科学研发有限公司地址201109上海市闵行区中春路1288号7幢(72)发明人曹方王博雅尹智慧邵灵燕朱晓云张凡(74)专利代理机构苏州三英知识产权代理有限公司32412代理人潘时伟(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/53(2006.01)权利要求书2页说明书7页(54)发明名称肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法(57)摘要本发明公开了一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，包括以下步骤：对供试品进行处理，得到目标样A；对酶标板进行包被以及封闭处理；将稀释后的供试品以及目标样A分别加入到被包被以及封闭处理的酶标板中，得到供试品测试样和目标样A测试样；供试品测试样和目标样A测试样中均加入特异性抗血清，得到供试品反应样和目标样A反应样；向供试品反应样和目标样A反应样中分别加入酶标抗体，然后加入底物液进行显色反应，并测出OD值；以及根据供试品反应样和目标样A反应样中得到的OD值计算出对应的多糖含量，从而计算出吸附率，本发明具有计算出疫苗中各个血清型的结合原液的吸附率，并通过吸附率得出各型结合原液免疫原性的优点。CN113607939ACN113607939A权利要求书1/2页1.一种肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，包括以下步骤：对供试品进行处理，得到目标样A；对酶标板进行包被以及封闭处理；将稀释后的供试品以及目标样A分别加入到被包被以及封闭处理的酶标板中，得到供试品测试样和目标样A测试样；供试品测试样和目标样A测试样中均加入特异性抗血清，得到供试品反应样和目标样A反应样；向供试品反应样和目标样A反应样中分别加入酶标抗体，孵育，然后加入底物液进行显色反应，并测出OD值；根据供试品反应样和目标样A反应样中得到的OD值计算出对应的多糖含量，并根据供试品反应样和目标样A反应样的多糖含量计算出吸附率。2.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，对所述供试品进行离心处理，离心后的上层清液，即为目标样A。3.如权利要求2所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，所述供试品进行离心处理的条件包括：相对离心率为(5000～6500)×g、温度为4～6℃以及持续时间为5～10min。4.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，对所述酶标板的包被过程包括：将被包被液稀释过的破伤风抗毒素加入至酶标板中，然后在2～8℃的条件下包被16～18h，再使用洗涤缓冲液洗涤酶标板1～2次，对酶标板的封闭处理过程包括：向包被处理过的酶标板中加入封闭液，然后在温度为36.9～37℃条件下放置1～2h，再用洗涤缓冲液洗涤酶标板3～4次。5.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，将稀释后的供试品以及目标样A分别加入到被包被以及封闭处理后的酶标板中，并在36.9～37℃的温度下孵育1～2h后，得到供试品测试样和目标样A测试样。6.如权利要求5所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，所述供试品以及目标样A的稀释倍数为400～600倍。7.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，向供试品测试样和目标样A测试样中分别加入特异性抗血清后，均在36.9～37℃条件下孵育1～1.5h，再用洗涤缓冲液洗涤酶标板3～4次后，得到供试品反应样和目标样A反应样。8.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，所述酶标抗体为HRP标记羊抗兔IgG或者AP标记羊抗兔IgG。9.如权利要求8所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，将所述酶标抗体按照1：5000～8000稀释后再分别加入至供试品反应样和目标样A反应样中，在温度为36.9～37℃的条件下孵育1～1.5h后，再用洗涤缓冲液洗涤酶标板5～6次。10.如权利要求1所述的肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法，其特征在于，所述显色反应的条件包括：在温度为36.9～37℃的条件下放置15～20min，再分别加2CN113607939A权利要求书2/2页入硫酸溶液进行终止酶反应，最后用酶标仪读取OD值。3CN113607939A说明书1/7页肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法技术领域[0001]本发明是关于利用各型多糖与载体蛋白通过化学方式结合形成多糖