肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115754270A(43)申请公布日2023.03.07(21)申请号202211499786.7(22)申请日2022.11.28(71)申请人苏州聚微生物科技有限公司地址215128江苏省苏州市吴中区吴中经济开发区郭巷街道淞葭路818号富民三期2幢东B区5层(72)发明人胡浩刘佳杨莹莹张苗苗(74)专利代理机构华进联合专利商标代理有限公司44224专利代理师汪贝贝(51)Int.Cl.G01N33/53(2006.01)G01N33/569(2006.01)G01N33/68(2006.01)权利要求书2页说明书9页(54)发明名称肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法(57)摘要本申请通过改变脱氧胆酸钠溶液浓度，提高待测蛋白的沉淀度，进而提高对于肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定的准确度。同时，本申请确定蛋白含量在60μg/ml～90μg/ml范围内，可以最大程度上减弱蛋白质含量测定稀释液对蛋白含量测定的影响，并使蛋白回收率在95％～105％之间。本申请的肺炎球菌多糖蛋白结合中蛋白含量的测定方法具有准确性强、稳定度高的特点，与传统的Lowry法相比结果更加可靠，可应广泛用于肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定中。CN115754270ACN115754270A权利要求书1/2页1.一种肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1、使用待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液分别制备吸附蛋白与总蛋白，所述待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液中总蛋白的含量控制在60μg/mL～90μg/mL；所述吸附蛋白的制备过程包括：取所述待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液，离心，去上清，制备吸附蛋白；所述总蛋白的制备过程包括：取所述待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液，加入第一蛋白沉淀剂，混匀，室温放置，再加入第二蛋白沉淀剂，混匀，室温放置，离心，去上清，制备总蛋白；步骤S2、分别测定吸附蛋白含量与总蛋白含量，根据吸附蛋白含量与总蛋白含量确定所述待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白的吸附率。2.根据权利要求1所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，步骤S2中所述第一蛋白沉淀剂为脱氧胆酸钠溶液，所述第二蛋白沉淀剂为三氯乙酸溶液。3.根据权利要求2所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，所述脱氧胆酸钠溶液体积浓度为0.8％～1.2％，且所述脱氧胆酸钠溶液与所述待测肺炎球多糖蛋白结合疫苗溶液的体积比为1：(8～12)；所述三氯乙酸溶液体积浓度为70％～75％，且所述三氯乙酸溶液与所述待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液的体积比为1：(8～12)。4.根据权利要求1所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，通过加入蛋白含量测定稀释液使所述肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液中总蛋白含量控制在60μg/mL～90μg/mL。5.根据权利要求4所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，所述蛋白含量测定稀释液中含有佐剂、pH调节剂和分散剂。6.根据权利要求5所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，所述佐剂为磷酸铝，所述pH调节剂为琥珀酸，所述分散剂为吐温80；可选地，所述待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液中所述磷酸铝终浓度范围为0.20mg/mL～0.30mg/mL；可选地，所述待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液中所述吐温80终体积浓度范围为0.18％～0.22％；可选地，所述待测肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗溶液中所述琥珀酸终浓度范围为3.7mmol/L～5.7mmol/L。7.根据权利要求1所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，步骤S1中在离心去上清后还包括采用复溶剂复溶收集物的步骤；可选地，所述复溶剂包括氢氧化钠、碳酸钠、二水合酒石酸二钠和五水硫酸铜。8.根据权利要求1～7任一项所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，步骤S1中吸附蛋白制备过程中的离心条件为6000×g～10000×g离心8min～12min。9.根据权利要求1～7任一项所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定2CN115754270A权利要求书2/2页方法，其特征在于，步骤S1中总蛋白制备过程中离心条件为3000×g～7000×g离心25min～35min。10.根据权利要求1～7任一项所述的肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗中蛋白吸附率的测定方法，其特征在于，所述肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗包括以下任意一种肺炎链球菌的多糖蛋白结合物：1型、3型、4型、5型、6A型、6B型、7F型、9V型、14型、18C型、19A型、19