5种病原菌多重PCR检测的引物、探针及其试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113621727A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号202110705080.0C12N15/11(2006.01)(22)申请日2021.06.24C12R1/445(2006.01)C12R1/44(2006.01)(71)申请人领航基因科技（杭州）有限公司C12R1/01(2006.01)地址310000浙江省杭州市萧山区南阳街C12R1/72(2006.01)道横蓬园区红山工业区(72)发明人宋小慧夏江(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人王欢(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/689(2018.01)C12Q1/6851(2018.01)C12Q1/14(2006.01)C12Q1/06(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表3页(54)发明名称5种病原菌多重PCR检测的引物、探针及其试剂盒(57)摘要本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及5种病原菌多重PCR检测的引物、探针及其试剂盒。本发明引物探针支持高通量检测，可快速实现金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和念珠菌五种病原菌的联合检测，准确高、特异性好。根据目标病原体的定量/半定量检测结果，可实时、快速监测血流感染患者体内的特定病原体的变化，及时评估患者状况，能有效地起到准确诊断这些病原体，做到早发现、早预防、早治疗、早控制，为临床医生提供辅助治疗建议，如合理选择使用抗菌药物，以减少医院感染机会，在科研领域和临床上具有极高的应用价值。CN113621727ACN113621727A权利要求书1/1页1.5种病原菌多重PCR检测的引物、探针组，其特征在于，包括：用于检测金黄色葡萄球菌的SEQIDNO：1～2所示核苷酸序列的引物和SEQIDNO：3所示核苷酸序列的探针；用于检测凝固酶阴性葡萄球菌的SEQIDNO：4～5所示核苷酸序列的引物和SEQIDNO：6所示核苷酸序列的探针；用于检测屎肠球菌的SEQIDNO：7～8所示核苷酸序列的引物和SEQIDNO：9所示核苷酸序列的探针；用于检测粪肠球菌的SEQIDNO：10～11所示核苷酸序列的引物和SEQIDNO：12所示核苷酸序列的探针；和用于检测念珠菌的SEQIDNO：13～14所示核苷酸序列的引物和SEQIDNO：15所示核苷酸序列的探针。2.权利要求1所述的引物、探针组在制备金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和念珠菌多重PCR检测的试剂盒中的应用。3.5种病原菌多重检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物、探针组。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括检测试剂和核酸提取试剂。5.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述检测试剂包括无菌水、PCRMix。6.5种病原菌的多重PCR检测的方法，其特征在于，利用权利要求1所述的引物探针组或权利要求3或4所述的试剂盒进行检测。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，基于多重荧光PCR或多重数字PCR平台进行检测。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，基于多重数字PCR平台的检测方法包括以下步骤：(1)提取待测样本核酸；(2)配置数字PCR反应液；(3)制备液滴芯片；(4)运行液滴芯片扩增程序后，采用生物芯片阅读仪进行分析后报告输出。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述待测样本为感染患者血浆样本或无症状定植者肛肠试子样本。10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述扩增程序包括：95℃预变性5min；95℃变性15秒，60℃退火30秒，循环40次。2CN113621727A说明书1/8页5种病原菌多重PCR检测的引物、探针及其试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及5种病原菌多重PCR检测的引物、探针及其试剂盒。背景技术[0002]血流感染(bloodstreaminfection,BSI)是指各种病原微生物侵入血液循环，在血液中繁殖，释放毒素及代谢产物，并诱导细胞因子释放，引起全身炎症反应综合征，进一步导致血压下降、感染性休克、凝血及纤溶系统改变，最终引起全身多器官功能不全，是一种严重的全身感染。入侵血液的病原体主要为细菌、真菌以及霉菌。细菌(包括G‑阴性菌和G+阳性菌)仍是主要的病原微生物，据CHINET2020数据显示，临床血液标本分离菌的主要细菌依次为大肠埃希菌(23.18％)、肺炎克雷伯菌(16.51％)、表皮葡萄球菌(8.39％)、金黄色葡萄球菌(7.90％)、人葡萄球菌(6.18％)、屎肠球菌(3.95％)、铜绿假单胞菌(3.32％)、鲍曼不动杆菌(2.95％)、粪肠球菌(2.55％)、阴沟肠杆