检测口蹄疫A型病毒的荧光RT-PCR引物和探针及其试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103382510A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103382510103382510A(43)申请公布日2013.11.06(21)申请号201310307094.2(22)申请日2013.07.22(71)申请人广西壮族自治区动物疫病预防控制中心地址530001广西壮族自治区南宁市西乡塘区友爱北路51号(72)发明人熊毅冯淑萍颜健华梁丹洁李春英李军(74)专利代理机构广西南宁汇博专利代理有限公司45114代理人朱萍球(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)G01N21/64(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书9页说明书9页附图1页附图1页(54)发明名称检测口蹄疫A型病毒的荧光RT-PCR引物和探针及其试剂盒(57)摘要本发明公开了检测口蹄疫A型病毒的荧光RT-PCR引物和探针及其试剂盒，所述引物的上游引物核苷酸序列为5′-TGCCCACTTCCTTCAAC-3′，下游引物核苷酸序列为5′-CTCCAGGTCAGAGAAGTAGT-3′；所述探针为5′-F-ATGTCATTGACCTCATGCAGACCCACCA-Q-3′，其中F为报告荧光基团，Q为淬灭荧光基团；所述试剂盒包括所述的引物和探针。采用本发明检测口蹄疫A型病毒，具有敏感性高、特异性强、自动化程度高、快速简便等优点。CN103382510ACN103825ACN103382510A权利要求书1/1页1.检测口蹄疫A型病毒的荧光RT-PCR引物和探针，其特征在于，所述引物的上游引物核苷酸序列为5′-TGCCCACTTCCTTCAAC-3′，下游引物核苷酸序列为5′-CTCCAGGTCAGAGAAGTAGT-3′，所述探针为5′-F-ATGTCATTGACCTCATGCAGACCCACCA-Q-3′，其中F为报告荧光基团，Q为淬灭荧光基团。2.根据权利要求1所述的检测口蹄疫A型病毒的荧光RT-PCR引物和探针，其特征在于，所述的F为FAM、HEX或TET，所述的Q为TAMARA、BHQ或MGB。3.根据权利要求1所述的检测口蹄疫A型病毒的荧光RT-PCR引物和探针，其特征在于，所述的F为FAM，所述的Q为TAMARA。4.检测口蹄疫A型病毒的试剂盒,其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1至3中任一所述的引物和探针。5.根据权利要求4所述检测口蹄疫A型病毒的试剂盒,其特征在于，所述试剂盒还包括：RNA提取试剂、RT反应试剂、PCR反应试剂、阴性对照和阳性对照。6.根据权利要求5所述检测口蹄疫A型病毒的试剂盒,其特征在于：（1）所述RNA提取试剂包括：Trizol裂解液、氯仿、异丙醇和75%的DEPC乙醇；（2）所述RT反应试剂包括：5×buffer缓冲液、dNTPs、HIR和FMDV-Ad；（3）所述PCR反应试剂包括：TaqDNA酶、10×buffer缓冲液、dNTPs、MgCl2和cDNA；（4）所述阴性对照包括：DEPC水；（5）所述阳性对照包括：口蹄疫A型全病毒。2CN103382510A说明书1/9页检测口蹄疫A型病毒的荧光RT-PCR引物和探针及其试剂盒技术领域[0001]本发明属于动物病毒分子生物检测技术领域，具体涉及检测口蹄疫A型病毒的荧光RT-PCR引物和探针及其试剂盒。背景技术[0002]口蹄疫（Footandmouthdisease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的一种急性高度接触性传染病，主要侵害偶蹄动物，如牛、猪、羊等。其特征是发热、皮肤或粘膜发生水泡溃疡，尤其是在口腔和蹄叉部位。[0003]口蹄疫病毒（Footandmouthdiseasevirus,FMDV）属于小RNA病毒科，约有8500个核苷酸组成。病毒基因组由一个开放性阅读框（ORF）、一个5′端非编码区（NCR）和3′端非编码区（NCR）组成，ORF编码由4种结构蛋白（VP1、VP2、VP3和VP4）、RNA聚合酶（3D）、蛋白酶（L、2A、3C）以及其他非结构蛋白（如3A等）组成。口蹄疫病毒包括7个血清型和60余个亚型，7个血清型为：A型、亚洲I型、O型、C型、南非Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型，各型之间无交叉保护反应，同一血清不同分离株之间也存在广泛的抗原变异；由于亚型分类越来越复杂，现在由用于分析基因组遗传衍化关系的基因型代替。[0004]口蹄疫在亚洲主要流行有A、O型、C型、亚洲I型4个血清型，截至目前，我国仅见O型、亚洲I型、A型三个血清型的口蹄疫。A型在1960—1975年曾流行20多省。目前，A型口蹄疫病毒在我国已广为扩散，是仅次于O型口蹄疫的世界主要流行毒株。广西地处我国沿海地区西南部，东部毗邻广东，西南与