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本发明涉及核酸检测领域,具体涉及一种等温核酸检测酶组合物、试剂盒及其用途和检测方法。本发明提供的一种等温核酸检测的酶组合物,包括重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶、重组酶辅助蛋白、T7RNA聚合酶和Cas13a蛋白;利用所述酶进行等温核酸检测时,无需对扩增产物进行单链化处理,实现对目的片段的一步法扩增及检测。