一种核酸检测试剂盒及检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114231401A(43)申请公布日2022.03.25(21)申请号202210154654.4(22)申请日2022.02.21(71)申请人北京芯迈微生物技术有限公司地址101299北京市平谷区中关村科技园区平谷园兴谷A区7号-21032(集群注册)(72)发明人李子熹(74)专利代理机构北京天奇智新知识产权代理有限公司11340代理人赵昊(51)Int.Cl.C12M1/34(2006.01)C12Q1/6844(2018.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称一种核酸检测试剂盒及检测方法(57)摘要本发明提出一种核酸检测试剂盒及检测方法，试剂盒以微流控芯片作为载体，包括进样区、微通道和废液区，微通道内设置有多条T线和C线，不同的T线上包被有含有不同目的片段的核酸单链，C线上包被有内参单链，将待测样本中的核酸扩增后变性成核酸单链，核酸单链与核酸染料混合后在冰浴条件下与包被在T线上的对应的核酸单链结合形成被核酸染料染色的核酸双链，从而产生荧光，实现对多重目的片段的检测，该方法操作简单、便捷高效。CN114231401ACN114231401A权利要求书1/1页1.一种核酸检测试剂盒，以微流控芯片作为载体，其特征在于，所述微流控芯片包括微通道和分别与微通道两端连通的加样区和废液区，废液区与外界大气连通，废液区内设置有能够沿微通道长度方向移动的吸水性材料，吸水性材料向微通道方向移动后能够与微通道的出口端接触，所述微通道包括设置有不少于两条T线的检测区和设置有C线的质控区，每条T线上分别包被有与不同目的片段配对的核酸单链，C线上包被有内参单链，加样区与T线之间固定有核酸染料和配对内参。2.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述内参单链采用非人源的核酸产物。3.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述核酸染料为SYBRGreenI。4.一种核酸检测方法，其特征在于，应用权利要求1‑3中任一试剂盒，包括以下步骤：（a）核酸扩增：核酸扩增得到含有多种目的片段的核酸双链产物；（b）核酸变性：使核酸双链产物中的核酸双链变性成核酸单链，从而得到核酸变性产物；（c）目的核酸检测：核酸变性产物从加样区的加样孔进入微流控芯片后流经微流控芯片上的核酸染料及配对内参，核酸变性产物与T线、C线充分反应后，将远离微通道的吸水性材料移动至与微通道出口端接触，多余的未被T线和C线结合的液体被吸收，反应终止；（d）结果分析：利用荧光仪对T线和C线信号值进行定性或定量检测。5.根据权利要求4所述的核酸检测方法，步骤（b）中，将核酸双链产物加热至80‑100℃高温，使核酸双链变性成核酸单链。6.根据权利要求4所述的核酸检测方法，步骤（b）中，向核酸双链产物中加入DNA解旋酶，然后高温加热使DNA解旋酶失活。7.根据权利要求5或6所述的核酸检测方法，步骤（c）中对核酸变性产物进行降温。8.根据权利要求7所述的核酸检测方法，步骤（c）中将微流控芯片置于冰浴环境下使核酸变性产物降温。9.根据权利要求4所述的核酸检测方法，还包括以下步骤：核酸检测反应终止后，向加样孔内加入缓冲液，待吸水性材料完全吸收缓冲液后，再进行结果分析。10.根据权利要求4所述的核酸检测方法，步骤（a）中采用PAP、RAP或PCR法中的一种进行核酸扩增。2CN114231401A说明书1/7页一种核酸检测试剂盒及检测方法技术领域[0001]本发明属于生物技术及医学检测技术领域，尤其涉及一种核酸检测试剂盒及检测方法。背景技术[0002]核酸检测在多种领域得到广泛应用，包括刑事侦查、病原微生物检测、疾病诊断等。一般情况下，环境样本或者生理样本中靶标核酸含量非常少，为使结果更为准确，常常将微量的目的片段进行扩增，然后将扩增产物进行恒压电泳，电泳结束后取出凝胶置于紫外成像仪中观察，并拍照记录试验结果，根据标准参照物比对目的片段的大小，从而得出阴性或阳性的实验结果。这种分析方法主要集中在传统实验室中，对操作人员的专业性要求较高，而且操作繁琐耗时，不太适用于快速的现场检测。[0003]为此基于微流控芯片的核酸检测方法应运而生，现阶段，基于微流控芯片的核酸检测方法主要依靠聚合酶链式反应（PCR）或环介导等温扩增技术（LAMP），但这些技术往往只能针对一种目的片段进行检测，对于多基因片段的混合样本中出现多种目的片段时，无法特异性区分，需要进行多次检测，在多重基因检测领域存在较大的局限性。发明内容[0004]本发明为了克服核酸检测过程复杂、检测效率低的问题，提供一种核酸检测试剂盒及检测方法，可以在较短时间内精准、量化地检测多重核酸目的片段、快速高效、简便安全。[0005]为实现上述目的，本发明提出