用于靶向肿瘤细胞的多肽偶联物及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114181319A(43)申请公布日2022.03.15(21)申请号202111425242.1A61K39/00(2006.01)(22)申请日2021.11.26A61K47/64(2017.01)A61P35/00(2006.01)(71)申请人北京双赢科创生物科技有限公司A61P35/02(2006.01)地址100176北京市大兴区北京经济技术开发区科创六街88号院7号楼3单元301室(72)发明人秦志海陶宁李建茹陈波李香群(74)专利代理机构北京知呱呱知识产权代理有限公司11577代理人杜立军(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C07K1/10(2006.01)C12N5/09(2010.01)权利要求书1页说明书8页序列表2页附图5页(54)发明名称用于靶向肿瘤细胞的多肽偶联物及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种用于靶向肿瘤细胞的多肽偶联物及其制备方法与应用。所述多肽偶联物包括靶向肿瘤细胞的插入肽、偶联剂以及CD19多肽；其中，所述插入肽通过所述偶联剂与所述CD19多肽连接；所述插入肽选自如下(a1)或(a2)：(a1)氨基酸序列如SEQIDNO.1所述的多肽；(a2)将SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且为具有靶向肿瘤细胞功能由(a1)衍生的多肽。本发明利用了原本影响肿瘤的发展和治疗效果的肿瘤低氧和酸化特征，令其成为治疗的靶向条件，能够将目标分子特异性的插入到肿瘤微环境的细胞中，给肿瘤带有特异性的标志，为靶向杀伤和治疗提供靶点，从而吸引免疫细胞靶向攻击和杀伤。CN114181319ACN114181319A权利要求书1/1页1.一种多肽偶联物，其特征在于，所述多肽偶联物包括靶向肿瘤细胞的插入肽、偶联剂以及CD19多肽；其中，所述插入肽通过所述偶联剂与所述CD19多肽连接；所述插入肽选自如下(a1)或(a2)：(a1)氨基酸序列如SEQIDNO.1所述的多肽；(a2)将SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且为具有靶向肿瘤细胞功能由(a1)衍生的多肽。2.如权利要求1所述的多肽偶联物，其特征在于，所述偶联剂为磺基琥珀酰亚胺基4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷‑1‑羧酸酯。3.如权利要求1所述的多肽偶联物，其特征在于，所述CD19多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。4.一种多肽偶联物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将CD19多肽分子与偶联剂连接，得到CD19多肽偶联物；将所述CD19多肽偶联物与靶向肿瘤细胞的插入肽连接，得到所述多肽偶联物；所述偶联剂为磺基琥珀酰亚胺基4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷‑1‑羧酸酯。5.如权利要求4所述的多肽偶联物的制备方法，其特征在于，所述CD19多肽偶联物的制备方法为：将4800nmol偶联剂溶解到300μLPBS溶液中，得到偶联剂溶液；将10nmol的CD19多肽溶解到200μLPBS中，得到CD19多肽溶液将偶联剂溶液和CD19多肽溶液加入到1.5mL离心管中，室温摇晃1‑3小时，控制混合溶液的pH为7.4，得到CD19多肽偶联物溶液，纯化得CD19多肽偶联物。6.如权利要求5所述的多肽偶联物的制备方法，其特征在于，所述CD19多肽偶联物与靶向肿瘤细胞的插入肽连接过程为：向所述纯化的CD19多肽偶联物溶液中加入4800nmol的靶向肿瘤细胞的插入肽，室温摇晃4‑6h反应，纯化反应产物，得到所述多肽偶联物。7.如权利要求6所述的多肽偶联物的制备方法，其特征在于，所述靶向肿瘤细胞的插入肽为pHLIP。8.含权利要求1‑3中任一项所述的多肽偶联物的细胞。9.权利要求1‑3中任一项所述的多肽偶联物在制备用于肿瘤细胞的识别和/或标记和/或分选和/或药物靶向的产品中的应用。2CN114181319A说明书1/8页用于靶向肿瘤细胞的多肽偶联物及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于靶向肿瘤细胞的多肽偶联物及其制备方法与应用。背景技术[0002]肿瘤微环境是由肿瘤细胞、多种基质细胞以及一系列的细胞因子和趋化因子组成。其中基质细胞包括成纤维细胞、肿瘤浸润的免疫细胞、内皮细胞、骨髓来源未成熟细胞等；细胞因子如TNF、VEGF、IL‑1等；趋化因子如CXCL12、CCL27、CCL21等。细胞因子和趋化因子可以由肿瘤细胞分泌，亦可由基质细胞和上述浸润的免疫细胞产生。这些细胞和活性介质一同形成稳定的肿瘤免疫微环境，保护肿瘤组织逃脱机体的免疫监视并促进肿瘤进展。肿瘤细胞具有很强的异质性和增殖能力，而其在生长过程中的高突变率使我们在肿瘤治疗过程中，很难能