糖基化多肽及其与载体蛋白的偶联物及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CN104558112A(43)申请公布日(43)申请公布日2015.04.29(21)申请号201310503612.8(22)申请日2013.10.23(71)申请人北京怡成生物电子技术股份有限公司地址100016北京市朝阳区酒仙桥东路1号M2号楼5层(72)发明人段学军杨彬胡昕芳郭振刚钟啸李元光何伟(74)专利代理机构北京三友知识产权代理有限公司11127代理人韩蕾(51)Int.Cl.C07K7/06(2006.01)C07K19/00(2006.01)G01N33/72(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图4页(54)发明名称糖基化多肽及其与载体蛋白的偶联物及其制备方法与应用(57)摘要本发明提供了一种糖基化多肽及其与载体蛋白的偶联物及其制备方法与应用，所述的糖基化多肽具有如下所示的序列结构：Glyco-Val-His-Leu-Thr-Pro-Tyr-Tyr-Cys，所述的糖基化多肽与载体蛋白的偶联物是糖基化多肽的末端Cys偶联载体蛋白（如牛血清白蛋白、肌红蛋白或血蓝蛋白等）后的产物，所述的糖基化多肽或其与载体蛋白的偶联物能代替昂贵的人糖化血红蛋白抗原纯制品制备层析试条（试纸条），该层析试条能快速、精确、定量、简便的检测全血中的糖化血红蛋白。CN104558112ACN104558112A权利要求书1/2页1.一种糖基化多肽，该糖基化多肽具有如下所示的序列结构：Glyco-Val-His-Leu-Thr-Pro-Tyr-Tyr-Cys。2.一种糖基化多肽与载体蛋白的偶联物，该偶联物是权利要求1所述的糖基化多肽的末端Cys偶联载体蛋白后的产物。3.根据权利要求2所示的糖基化多肽与载体蛋白的偶联物，其中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、肌红蛋白或血蓝蛋白。4.权利要求2或3所述的糖基化多肽与载体蛋白的偶联物的制备方法，该方法包括步骤：将所述载体蛋白经SMCC修饰，在水溶液中反应活化所述载体蛋白，获得活化的载体蛋白溶液；将所述糖基化多肽溶解于含0.1MEDTA的0.1MpH7.2PBS溶液中；将上述糖基化多肽溶液加入到活化的载体蛋白溶液中，混合均匀得混合液，室温放置1～3h；用0.17%碳酸氢铵平衡sephadexG75柱，将上述混合液上柱层析，淋洗液为0.17%碳酸氢铵；280nm波长下监控收集淋出液，有两个280nm峰形，其中第一个峰形的流出液是糖基化多肽与载体蛋白的偶联物。5.权利要求1所述的糖基化多肽、或权利要求2或3所述的糖基化多肽与载体蛋白的偶联物在制备检测糖化血红蛋的层析试条中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其中，权利要求1所述的糖基化多肽、或权利要求2或3所述的糖基化多肽与载体蛋白的偶联物是代替人糖化血红蛋白抗原纯制品，与待检样品中的人糖化血红蛋白抗原竞争结合人糖化血红蛋白抗体，从而进行检测。7.一种检测糖化血红蛋白的层析试条，该检测糖化血红蛋白的层析试条上设有权利要求1所述的糖基化多肽、或权利要求2或3所述的糖基化多肽与载体蛋白的偶联物，以所述糖基化多肽或偶联物与待检样品中的人糖化血红蛋白抗原竞争结合人糖化血红蛋白抗体，从而进行检测。8.根据权利要求7所述的检测糖化血红蛋白的层析试条，该检测糖化血红蛋白的层析试条包括底板以及在底板上依次顺序设置的样品垫、结合物释放垫、反应膜和吸收垫；其中，按照待测样品在试条上的层析流动的上下游方向：所述样品垫位于试条的起始端，其是用于接受待测样品，样品垫的末端与结合物释放垫部分叠合；所述结合物释放垫的前端与样品垫部分叠合，末端与反应膜部分叠合；所述反应膜贴合在底板上，前端与结合物释放垫部分叠合，末端与吸收垫部分叠合，且反应膜上未与结合物释放垫或吸收垫叠合的中间部分设置有检测区域，所述检测区域设有权利要求1所述的糖基化多肽、或权利要求2或3所述的糖基化多肽与载体蛋白的偶联物；所述吸收垫设置在试条距样品垫最远的位置，与反应膜的末端部分叠合。9.根据权利要求7所述的检测糖化血红蛋白的层析试条，其中，所述结合物释放垫上设有微球标记蛋白或胶体金标记蛋白，所述微球的直径范围为100nm～300nm；优选地，所述标记蛋白为糖化血红蛋白单克隆抗体。10.根据权利要求7所述的检测糖化血红蛋白的层析试条，其中，所述反应膜上未与结2CN104558112A权利要求书2/2页合物释放垫或吸收垫叠合的中间部分还设置有对照区域，该对照区域设置在检测区域的下游，对照区域内包被有糖化血红蛋白羊抗鼠二抗。3CN104558112A说明书1/9页糖基化多肽及其与载体蛋白的偶联物及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明涉及一种糖基化多肽及其与载体蛋白的偶联物及其制备方法与应用，所述的糖基化多肽或其与载体蛋