用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD-1蛋白-细胞毒素偶联物及其制备方法、应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115806630A(43)申请公布日2023.03.17(21)申请号202211014151.3C07K1/36(2006.01)(22)申请日2022.08.23A61K47/64(2017.01)A61K38/07(2006.01)(71)申请人上海交通大学A61P35/00(2006.01)地址200240上海市闵行区东川路800号C12R1/19(2006.01)(72)发明人颜德岳夏雪霖夏小霞黄卫杨晓媛(74)专利代理机构上海汉声知识产权代理有限公司31236专利代理师陈蕾胡晶(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/70(2006.01)C07K1/10(2006.01)C07K1/22(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书2页说明书7页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD-1蛋白-细胞毒素偶联物及其制备方法、应用(57)摘要本发明属于药物研发领域，具体涉及用于肿瘤免疫靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物及其制备方法、应用。该偶联物由PD‑1(程序化死亡受体1)蛋白与细胞毒素通过小分子连接基偶联得到。其中，PD‑1蛋白对多种肿瘤细胞表面过量表达的PD‑L1(程序化死亡受体配体1)具有特异性结合活性和高度亲和力；细胞毒素是高效的抗肿瘤药物。该偶联物中的PD‑1对肿瘤上PD‑L1的特异性识别，既可阻断T/B细胞程序化死亡的发生，又能实现肿瘤的靶向治疗。本发明利用PD‑1蛋白与海兔毒素(MMAE)衍生物偶联，制备了两者的偶联物PD‑1‑MMAE。该偶联物通过其中PD‑1与PD‑L1的相互结合作用，在实现免疫检查点抑制的同时，靶向递送并释放MMAE至肿瘤细胞，达到免疫/化疗协同治疗肿瘤的目的。CN115806630ACN115806630A权利要求书1/2页1.用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物，其特征在于，包括细胞毒素和具有主动靶向/免疫调节功能的PD‑1蛋白，所述的偶联物由细胞毒素与PD‑1蛋白之间通过小分子连接基共价偶联而得；所述的偶联物结构如式I所示，其中A为PD‑1蛋白，L为有机小分子连接基，为细胞毒素。2.根据权利要求1所述的用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物，其特征在于，所述的PD‑1蛋白为靶向人PD‑L1(程序化死亡受体‑配体1)受体的人PD‑1(程序化死亡分子)蛋白，所述PD‑1蛋白的氨基酸序列为PD‑1蛋白的胞外端功能性片段结构域或与该功能片段至少80％同源性序列的结构域。3.根据权利要求1所述的用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物，其特征在于，所述的细胞毒素选自海兔毒素(MMAE)及其衍生物。4.根据权利要求1所述的用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物，其特征在于，所述的小分子连接基的结构式如以下式(II)所示：其中，n独立地选自2～10。5.根据权利要求1所述的用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物，其特征在于，所述偶联物的结构式如以下式(III)所示：6.一种用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)通过大肠杆菌发酵制备PD‑1蛋白，并通过柱层析对其分离纯化，得到PD‑1蛋白；(2)将细胞毒素与小分子连接基键合起来，再进一步与PD‑1蛋白进行偶联反应，得到具有主动靶向功能的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物。2CN115806630A权利要求书2/2页7.一种如权利要求1‑5任一项所述的用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物、或如权利要求6所述的制备方法制得的偶联物在制备用于肿瘤免疫/靶向性治疗的药物中的应用。3CN115806630A说明书1/7页用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物及其制备方法、应用技术领域[0001]本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一类用于肿瘤免疫/靶向性治疗的PD‑1蛋白‑细胞毒素偶联物及其制备方法、应用。背景技术[0002]经过数十年来医药界不断的投入与研究，基于将小分子化疗药物偶联在单克隆抗体上的抗体药物偶联(antibody‑drugconjugate，ADC)技术已得到蓬勃的发展。到目前为止，已有14款ADC陆续上市，并有80余种ADC药物处于临床试验阶段。目前，在这些ADC研究中使用的单克隆抗体均为非免疫型抗体，其作用相对单一，主要是与肿瘤表面特异性高表达的某些抗原结合，进而将携带的小分子化疗药物递送至肿瘤部位，因此如何充分发挥抗体蛋白除作为靶向载体外的其他功能，仍需要更深入的探索。[0003]2018年，诺贝尔生理学或医学奖颁