抑制水牛TREM1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102517287A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102517287A(43)申请公布日2012.06.27(21)申请号201210006526.1A61P31/04(2006.01)(22)申请日2012.01.10(71)申请人广西大学地址530005广西壮族自治区南宁市大学路100号(72)发明人李湘萍石德顺路新梅李美青乔树叶(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司45104代理人杨立华(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/867(2006.01)C12N15/66(2006.01)A61K48/00(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书55页页序列表序列表88页页附图附图22页页(54)发明名称抑制水牛TREM1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用(57)摘要本发明公开了一种抑制水牛TREM1基因表达的shRNA，该shRNA为shRNA-TREM194、或shRNA-TREM294，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19nt的siRNA反义链和终止信号。该shRNA能高效抑制水牛TREM1基因的表达。本发明还公开了上述shRNA的慢病毒表达载体及其构建方法。实验证实，应用本发明的shRNA可有效稳定地抑制水牛TREM1基因表达，展示了在布氏杆菌病防治中的一定的应用前景，也为进一步了解TREM1在LPS诱导的革兰氏阴性菌跨膜机制和信号转导中的作用奠定了基础。CN102578ACN102517287A权利要求书1/1页1.一种抑制水牛TREM1基因表达的shRNA，其特征在于：该shRNA为shRNA-TREM194或shRNA-TREM294，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19nt的siRNA反义链和终止信号；所述loop环的碱基序列为TTCAAGAGA；所述终止信号的碱基序列为TTTTTTT；所述shRNA-TREM194的正义链具有序列表SEQ.ID.No.3的碱基序列，其反义链具有序列表SEQ.ID.No.4的碱基序列；所述shRNA-TREM294的正义链具有序列表SEQ.ID.No.5的碱基序列，其反义链具有序列表SEQ.ID.No.6的碱基序列。2.根据权利要求1所述抑制水牛TREM1基因表达的shRNA的慢病毒表达载体，其特征在于该载体是：pSicoR-GFP-shTREM-194或pSicoR-GFP-shTREM-294。3.根据权利要求2所述抑制水牛TREM1基因表达的shRNA的慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于：所述慢病毒表达载体由合成的所述shRNA-TREM194或shRNA-TREM294分别克隆入慢病毒表达载体pSicoR-GFP中而得。4.根据权利要求1所述抑制水牛TREM1基因表达的shRNA在抑制水牛TREM1基因表达方面的应用。5.根据权利要求2所述抑制水牛TREM1基因表达的shRNA的慢病毒表达载体在抑制水牛TREM1基因表达方面的应用。6.根据权利要求1所述抑制水牛TREM1基因表达的shRNA在制备防治水牛布氏杆菌病药物方面的应用。7.根据权利要求2所述抑制水牛TREM1基因表达的shRNA的慢病毒表达载体在制备防治水牛布氏杆菌病药物方面的应用。2CN102517287A说明书1/5页抑制水牛TREM1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用技术领域[0001]本发明涉及水牛髓样触发受体1基因(TREM1)，尤其是一种抑制水牛TREM1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用。背景技术[0002]水牛是我国南方重要的农业生物资源，它具有适应性强、耐高温高湿、易饲养、使用年限长和乳品营养价值高等特性，如今已成为极具开发价值的家畜品种。然而，水牛的低繁殖力、较高的疾病发生率却严重制约了我国水牛产业的发展。其中，布氏杆菌病引起的母牛流产、不育在实际生产中极其常见，这不仅给畜牧业造成重大的经济损失，而且严重威胁人类健康。长期以来，对布氏杆菌病的治疗手段主要是使用抗菌素和疫苗，前者容易产生耐药性，后者免疫效果不稳定、持续时间短。因此，如何有效控制布氏杆菌病仍是一项重大挑战，亟需寻求一种新的防治途径。发明内容[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种抑制水牛TREM1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用。[0004]为解决上述技术问题本发明采用如下技术方案：[0005]抑制水牛TREM1基因表达的shRNA，该shRNA为shRNA-TREM194或shRNA-TREM294，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19n