一种特异抑制MALAT1基因表达的shRNA及其慢病毒表达载体的构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115851718A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211122979.0A61P35/00(2006.01)(22)申请日2022.09.15(71)申请人南昌大学地址330000江西省南昌市红谷滩新区学府大道999号(72)发明人胡萍林星丞张文华刘富红(74)专利代理机构南昌金轩知识产权代理有限公司36129专利代理师万敏(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/867(2006.01)C12N15/64(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K31/713(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称一种特异抑制MALAT1基因表达的shRNA及其慢病毒表达载体的构建方法和应用(57)摘要本发明涉及一种特异抑制MALAT1基因表达的shRNA及其慢病毒表达载体的构建方法和应用，属于基因工程技术领域。该特异抑制MALAT1基因表达的shRNA包括依次连接的靶序列、茎环结构、靶序列的互补序列以及终止位点，其中靶序列如SEQIDNo.1或SEQIDNo.2所示。本发明筛选得到对MALAT1基因表达具有明显抑制作用的shRNA，并在此基础上成功构建了敲减MALAT1基因的慢病毒表达载体及慢病毒，为进一步研究MALAT1基因的生物学功能提供更加可靠和便捷的研究手段。CN115851718ACN115851718A权利要求书1/1页1.一种特异抑制MALAT1基因表达的shRNA，其特征在于，包括依次连接的靶序列、茎环结构、所述靶序列的互补序列以及终止位点；其中，所述靶序列如SEQIDNo.1或SEQIDNo.2所示。2.一种特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体，其特征在于，包括载体及插入所述载体中如权利要求1所述的shRNA。3.根据权利要求2所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体，其特征在于，插入所述载体中的shRNA为双链核苷酸片段，所述双链核苷酸片段的两条链分别如SEQIDNo.3～SEQIDNo.4或SEQIDNo.5～SEQIDNo.6所示。4.根据权利要求2所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体，其特征在于，所述载体为PGMLV‑SB7RNAi，所述载体包括BamHI酶切位点及EcoRI酶切位点；所述shRNA包括BamHI酶切位点粘性末端及EcoRI酶切位点粘性末端，所述shRNA正向插入所述BamHI酶切位点和所述EcoRI酶切位点之间。5.一种特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：提供双链核苷酸片段，所述双链核苷酸片段包括如权利要求1所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA；将所述双链核苷酸片段插入慢病毒表达载体，得到所述特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体。6.根据权利要求5所述特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于，将所述双链核苷酸片段插入慢病毒表达载体后，还包括将含有所述双链核苷酸片段的慢病毒表达载体转入宿主细胞的步骤。7.根据权利要求6所述特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于，所述宿主细胞为293T细胞。8.一种重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌内含有如权利要求1所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA、如权利要求2～4任一项所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体、如权利要求5～7任一项所述的构建方法制得的shRNA慢病毒表达载体中的至少一种。9.权利要求1所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA、权利要求2～4任一项所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体、权利要求5～7任一项所述的构建方法制得的shRNA慢病毒表达载体或权利要求8所述的重组工程菌在制备治疗MALAT1基因异常表达相关疾病的药物中的应用。10.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA、权利要求2～4任一项所述的特异抑制MALAT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体、权利要求5～7任一项所述的构建方法制得的shRNA慢病毒表达载体或权利要求8所述的重组工程菌。2CN115851718A说明书1/9页一种特异抑制MALAT1基因表达的shRNA及其慢病毒表达载体的构建方法和应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种特异抑制MALAT1基因表达的shRNA及其慢病毒表达载体的构建方法和应用。背景技术[0002]肿瘤的形成是一个涉