抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103497953103497953A(43)申请公布日2014.01.08(21)申请号201310469472.7(22)申请日2013.10.10(71)申请人广西大学地址530004广西壮族自治区南宁市西乡塘区大学东路100号(72)发明人李湘萍石德顺林浪(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司45104代理人杨立华(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/867(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书5页说明书5页序列表6页序列表6页附图3页附图3页(54)发明名称抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用(57)摘要本发明公开了一种抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA，该shRNA为shSUV39H1-259或shSUV39H1-597，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19nt的siRNA反义链和终止信号。该shRNA能高效抑制水牛SUV39H1基因的表达。本发明还公开了上述shRNA的慢病毒表达载体及其构建方法。实验证实，应用本发明的shRNA可有效稳定地抑制水牛SUV39H1基因表达，在基因功能研究和转基因动物制备过程中，可通过抑制SUV39H1基因表达探讨其对外源转目的基因表达效率的影响及其作用机理，为寻找提高转基因动物中外源基因的表达效率提供新的思路和方法。CN103497953ACN1034975ACN103497953A权利要求书1/1页1.一种抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA，其特征在于：该shRNA为shSUV39H1-259或shSUV39H1-597，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19nt的siRNA反义链和终止信号；所述loop环的碱基序列为TTCAAGAGA；所述终止信号的碱基序列为TTTTTTT；所述shSUV39H1-259的正义链具有序列表SEQ.ID.No.1的碱基序列，其反义链具有序列表SEQ.ID.No.2的碱基序列；所述shSUV39H1-597的正义链具有序列表SEQ.ID.No.3的碱基序列，其反义链具有序列表SEQ.ID.No.4的碱基序列。2.根据权利要求1所述抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA的慢病毒表达载体，其特征在于该载体是：pSicoR-GFP-shSUV39H1-259或pSicoR-GFP-shSUV39H1-597。3.根据权利要求2所述抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA的慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于：所述慢病毒表达载体由合成的所述shSUV39H1-259或shSUV39H1-597分别克隆入慢病毒表达载体pSicoR-GFP中而得。4.根据权利要求1所述抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA在抑制水牛SUV39H1基因表达方面的应用。5.根据权利要求2所述抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA的慢病毒表达载体在抑制水牛SUV39H1基因表达方面的应用。6.根据权利要求1所述抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA在调控转基因细胞中外源基因的表达效率方面的应用。7.根据权利要求2所述抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA慢病毒表达载体在调控转基因细胞中外源基因的表达效率方面的应用。2CN103497953A说明书1/5页抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用技术领域[0001]本发明涉及水牛花斑抑制因子同源物1（SUV39H1）基因，尤其是一种抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用。背景技术[0002]水牛是我国南方主要大家畜之一，具有耐高温高湿、抗病力强、耐粗饲等生物学特性，非常适合我国南方农村饲养。水牛奶的品质好、营养价值高，其干物质的含量、乳脂率和总蛋白的含量均为普通牛奶的2倍，特别是乳酪蛋白的含量（4.14%），是黑白花奶牛的16倍（0.26%），是制造高档奶酪的优质原料。因此，开发利用水牛畜种资源，将现有役用水牛转化为乳用或乳肉兼用的商品水牛，是水牛畜牧产业发展的趋势。然而，水牛的自然繁殖率很低、种群生产性能低下，急需发展和完善一批与家畜遗传改良密切相关的农业高技术来提高水牛繁殖力。利用胚胎生物技术和克隆技术，特别是转基因克隆技术，是培育高繁殖力和高产奶量水牛新品种的一条有效技术措施。[0003]转基因动物制备过程中，外源基因的表达水平受到很多因素的影响，其中表观遗传修饰是影响外源基因表达效率的一个重要因素。组蛋白甲基化是组蛋白修饰方式之一，在广泛的表观修饰中，组蛋白甲基化对