凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102608337A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102608337A(43)申请公布日2012.07.25(21)申请号201210032584.1(22)申请日2012.02.14(66)本国优先权数据201110101378.72011.04.22CN(71)申请人武汉塞力斯生物科技有限公司地址430040湖北省武汉市东西湖区金山大道1310号(72)发明人鲁翌田树伟刘介(74)专利代理机构武汉开元知识产权代理有限公司42104代理人陈家安(51)Int.Cl.G01N33/86(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书77页页附图附图11页(54)发明名称凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法(57)摘要凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，凝血活酶为兔脑组织因子和重组人组织因子。缓冲液体系包括：30-50mMTris-HCl；甘氨酸3～10％；小牛血清白蛋白1～5％；氯化钠0.6～1.3％；氯化钙6.8～8.4mM；NaN30.5％；缓冲液体系的pH值为6.0-8.0。所述凝血活酶还包括兔脑磷脂。它克服了不同仪器的方法差异使各类仪器的敏感度指数不一样的缺点，本发明将高灵敏的人重组凝血活酶与低灵敏度的兔脑粉提取凝血活酶结合起来，通过一定的配比制备出能够满足不同方法学血凝仪的PT试剂，使其ISI值均能接近1.0。本发明还同时公开了凝血酶原时间测定试剂盒的制备方法。CN1026837ACN102608337A权利要求书1/1页1.凝血酶原时间测定试剂盒，它由凝血活酶、缓冲液体系构成，其特征在于所述的凝血活酶包括兔脑组织因子和重组人组织因子，重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为2500-3000U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为8500-9500U/L。2.根据权利要求1所述的凝血酶原时间测定试剂盒，其特征在于所述每升缓冲液体系包括：30-50mM的Tris-HCl，占缓冲液体系重量3～10％的甘氨酸，占缓冲液体系重量1～5％的小牛血清白蛋白，占缓冲液体系重量0.6～1.3％的氯化钠，6.8～8.4mM的氯化钙，占缓冲液体系重量0.5％的NaN3，其余为水，缓冲液体系的PH值为6.0-8.0。3.根据权利要求1或2所述的凝血酶原时间测定试剂盒，其特征在于所述重组人组织因子在缓冲液体系中的用量为3000U/L，兔脑组织因子在缓冲液体系中的用量为9000U/L。4.根据权利要求3所述的凝血酶原时间测定试剂盒，其特征在于所述凝血活酶还包括兔脑磷脂0.5-1.5g/L。5.制备上述任一权利要求所述凝血酶原时间测定试剂盒的方法，其特征在于它包括如下步骤：首先将重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系采用不同的机型进行调试，调试所用的质控血浆为德灵INR标准血浆，通过此血浆测定出在在各种凝血分析仪上的ISI值即分析灵敏度；其次，将在不同的机型上的ISI值为1的重组人组织因子、兔脑组织因子和缓冲液体系的配比固定并分装，并分别真空冷冻干燥，即配成为不同机型的凝血酶原时间测定试剂盒。2CN102608337A说明书1/7页凝血酶原时间测定试剂盒及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种临床实验室用体外诊断试剂盒及其制备，它用于人血浆标本凝血酶原时间的测定。更具体地说它是一种采用兔脑组织因子和重组人组织因子联合制备凝血酶原时间测定试剂盒及其其制备方法。背景技术[0002]医院临床实验室常规凝血实验，即凝血常规四项包括凝血酶原时间测定(PT)、部分活化凝血活酶时间测定(APTT)、凝血酶时间测定(TT)、纤维蛋白原浓度测定(FIB)，主要用于出血性疾病的筛查与诊断、血栓性疾病与血栓前状态检查、各种抗凝治疗监测以及手术前检查。其中，PT为反应机体外源性凝血途径的主要检测指标，常用于：1血液凝固异常可疑包括凝血酶原复合物多个因子(II、VII、X)，因子V，纤维蛋白原及去纤维蛋白原血症的筛选实验；2监测及调整维生素K拮抗剂，香豆素诱导剂的治疗；3监测维生素K缺乏及肝脏疾病；4术前筛选可能的止血异常疾病。目前PT的临床检测多采用Quick法，其原理为在缺乏血小板的血浆内加入组织促凝血酶原激酶(组织因子)和Ca2+后凝血酶原转变为凝血酶，通过产生的凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。PT测定结果报告方式有三种：秒值、根据标准曲线计算的百分活度，国际标准化比率(internationalnormalizedratioINR)。PT测定结果受众多因素的影响，其中凝血酶原试剂为最重要的影响因素。商品化的组织因子在敏感性上与WHO推荐的有所不同，因此生产商需要对每批试剂确定一个敏感因子，此即国际敏感指数ISI(internationalsensitivityindex)