含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105603048A(43)申请公布日2016.05.25(21)申请号201610031222.9(22)申请日2016.01.18(71)申请人青岛古高生物科技有限公司地址266000山东省青岛市高新区河东路368号蓝色生物医药产业园6号楼1层101、102室(72)发明人胡小伟王华黄翔宇(74)专利代理机构青岛中天汇智知识产权代理有限公司37241代理人万桂斌(51)Int.Cl.C12Q1/56(2006.01)G01N33/86(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂及其制备方法(57)摘要本发明涉及一种稳定的液相凝血酶原时间测定试剂及其制备方法，所用的稳定剂为在一般稳定剂的基础上，加入了0.5-3mM杨梅酮和0.5-3mM咖啡酸。本发明的稳定剂组合，可以降低原料或工艺过程中有害金属离子、自由基对组织因子和磷脂的破坏，提高液相凝血酶原时间测定试剂的稳定性能。CN105603048ACN105603048A权利要求书1/1页1.一种含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂，其特征在于，含有稳定剂杨梅酮和咖啡酸，所述杨梅酮的含量为0.5-3mM，咖啡酸的含量为0.5-3mM。2.根据权利要求1所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂，其特征在于，杨梅酮的含量为2.5mM、咖啡酸的含量为2.5mM。3.根据权利要求1所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂，其特征在于，所述测定试剂中还含有重组组织因子、合成磷脂、氯化钙和肝素中和剂。4.根据权利要求3所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂，其特征在于，所述重组组织因子的含量为250-350nM、合成磷脂的含量为0.05-0.1mM、氯化钙的含量为8-13mM、肝素中和剂的含量为10-50μg/mL。5.根据权利要求3所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂，其特征在于，所述重组组织因子的含量为350nM、合成磷脂的含量为0.1mM、氯化钙的含量为10mM、肝素中和剂的含量为30μg/mL。6.根据权利要求1或3或4所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂，其特征在于，所述测定试剂中还含有稳定剂牛血清白蛋白、聚乙醇、氯化钠、麦芽糖、山梨酸钾中的一种或几种。7.根据权利要求6所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂，其特征在于，所述牛血清白蛋白的含量为0.05-1％、聚乙醇的含量为0.05-0.5％、氯化钠的含量为25-100mM、麦芽糖的含量为0.5-1.5％、山梨酸钾的含量为0.05-0.1％，其中的百分比均为质量体积百分比。8.根据权利要求6所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂，其特征在于，所述牛血清白蛋白的含量为0.5％、聚乙醇的含量为0.05％、氯化钠的含量为75mM、麦芽糖的含量为1.5％、山梨酸钾的含量为0.05％。9.权利要求1-8任一所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：分别配制含合成磷脂和组织因子的Tricine缓冲液，Tricine缓冲液浓度为50mM；将上述两者混合，制成重组组织因子的浓度为250-350nM、合成磷脂的浓度为0.05-0.1mM的混合液相，向混合相中加入8-13mM的氯化钙、10-50μg/mL的肝素中和剂、0.05-1％的牛血清白蛋白、0.05-0.5％的聚乙醇、25-100mM的氯化钠、0.5-1.5％的麦芽糖、0.05-0.1％的山梨酸钾，上述浓度及百分比均为在测定试剂中的终浓度。10.根据权利要求9所述的含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂的制备方法，其特征在于，含合成磷脂的Tricine缓冲液的配制方法为：用氯仿和甲醇的混合液溶解磷脂，混合液与磷脂的体积质量比为1:1，混合液中氯仿和甲醇的体积比为2:1；磷脂溶解后得到的胶状物置于50-55℃恒温；按照体积比1:20的比例将磷脂胶状物加入到50mM的Tricine缓冲液中，混合均匀，静置，除去不溶性组份。2CN105603048A说明书1/6页含杨梅酮和咖啡酸的凝血酶原时间测定试剂及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种含杨梅酮和咖啡酸的液态凝血酶原时间测定试剂及其制备方法。背景技术[0002]作为血液凝固因子中的第II因子，凝血酶原存在于血浆中，是由肝脏合成的维生素K依赖因子之一，含579个氨基酸残基的单链糖蛋白，分子量72,000。自N-末端起，有1个Gla区(1－40)，2个环区(41－271)和1个催化区(271－579)。Gla区内含10个r-羧基谷氨酸残基，主要功能为通过结合钙离子与磷脂联结。环区参与其与底物和辅因子间的相互作用，环区2可与FⅤa结