牛源性成分的LAMP检测方法的引物、检测方法和试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105838808A(43)申请公布日2016.08.10(21)申请号201610333595.1(22)申请日2016.05.18(71)申请人珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心地址519015广东省珠海市九洲大道东1144号(72)发明人罗宝正薄清如陈轩徐海聂廖秀云沙才华赵福振邵建宏(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205代理人李先林(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图2页(54)发明名称牛源性成分的LAMP检测方法的引物、检测方法和试剂盒(57)摘要本发明属于分子生物学领域，公开了一种牛源性成分的LAMP检测方法的引物和用这种引物检测的方法，以及包含这种引物的试剂盒。所述引物的序列如SEQIDNO.1～4所示。所述试剂盒包括引物、DNA提取试剂、2×反应液RM、BstDNA聚合酶、荧光染料和阴性对照。本发明建立的牛源性成分的LAMP检测方法和试剂盒具有特异性好、灵敏度高、快速、费用低廉等优点，可应用于动物组织及其加工品中牛源性成分的快速检测。CN105838808ACN105838808A权利要求书1/1页1.牛源性成分的LAMP检测方法的引物，其特征在于，所述引物包括：引物FIP：5’-TCACTGCTGTTTCCCGTGGCATCAAGCACACACCTGT-3’；引物BIP：5’-AATCTCGTGCCAGCCACCACGCCGTACTCCTGTT-3’；引物F3：5’-GCCCTCTAGGTCAACGA-3’；引物B3：5’-CGGTGTGCTTTAACACATTT-3’。2.一种牛源性成分的LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、提取待测样品DNA；S2、配制LAMP检测反应体系，反应体系包括权利要求1所述的引物；S3、以S1的DNA为模板进行LAMP扩增反应，用实时荧光法鉴定结果。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述反应体系为：2×反应液RM12.5μL，引物FIP、BIP各1.0μL，引物F3、B3各1.0μL，BstDNA聚合酶1.0μL，荧光染料0.5μL，DNA模版2.0μL，补水至25μL。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述引物FIP、BIP的浓度是40μmol/L，所述引物F3、B3的浓度是5μmol/L。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述扩增反应的程序为：保温阶段63℃30s，1个循环；循环阶段63℃15s，63℃45s，60个循环。6.一种检测牛源性成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DNA提取试剂、2×反应液RM、BstDNA聚合酶、荧光染料。2CN105838808A说明书1/7页牛源性成分的LAMP检测方法的引物、检测方法和试剂盒技术领域[0001]本发明涉及分子生物学中牛源性成分的LAMP检测方法，特别涉及牛源性成分的LAMP检测方法的引物和用这种引物检测的方法，以及包含这种引物的试剂盒。背景技术[0002]早在20世纪80年代，国外就已经重视对动物源性成分的检测并对其开展了鉴别的研究。而我国在近几年随着国内居民收入增加，人们对肉制品的需求量，特别是牛肉的需求量持续上涨。但由于牛肉价格高，不法分子使用廉价的肉比如猪肉、鸡肉、鸭肉冒充牛肉以此赚取利润。因此我们需要建立一种准确、快速、可靠的检测方法，这对保障消费者的合法权益和为相关部门打击不法分子提供有利的技术支持有着重要的意义。目前为止检测方法可分为物理、化学、免疫学和分子生物学这几类，具体例如色谱法、ELISA法、常规PCR法、实时荧光PCR法等。其中以PCR方法最为准确、快速、灵敏。而由于实时荧光PCR法在时间、准确性和灵敏度上等优势，使其成为了检测动物源性成分最常用的分子生物学法。但此方法需要依靠昂贵的设备，成本负担较重，且设备较笨重，无法离开实验室进行使用。[0003]环介导等温扩增技术（loop-mediatedisothermalamplification）是2000年由日本荣研株式会社的学者Notomi博士等人发明的一项新的DNA扩增技术。传统的PCR技术离不开反复升降温这个耗时耗能的过程，且反应程序设定也较繁琐。相比之下，LAMP技术克服了这些问题。根据LAMP技术的原理，它可实现在恒温条件下（一般在60~65℃）快速连续扩增，实现了实验过程快速、简便，仪器设备简单、便携，检测结果特异性强、灵敏度高的优点。LAMP扩增结果可用实时荧光法，通过实时荧光PCR仪（Real-TimePCRSystem）进行