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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107937574A(43)申请公布日2018.04.20(21)申请号201711131064.5(22)申请日2017.11.15(71)申请人锦州医科大学地址121000辽宁省锦州市松坡路三段40号申请人辽宁省畜牧科学研究院(72)发明人李冰朱延旭宋先忱张兴会刘孝刚刘宇明季伟(74)专利代理机构锦州辽西专利事务所(普通合伙)21225代理人王佳佳(51)Int.Cl.C12Q1/689(2018.01)C12Q1/6844(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图4页(54)发明名称羊副结核分支杆菌的LAMP检测引物及其LAMP检测试剂盒和LAMP检测方法(57)摘要一种羊副结核分支杆菌的LAMP检测引物及其LAMP检测试剂盒和LAMP检测方法,检测引物包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF。试剂盒包括Tris·HCl,KCl,(NH4)2SO4,Tween20,甜菜碱,MgSO4,dNTPeach,BstDNApolymerase,钙黄绿素指示剂,LAMP检测引物。利用LAMP试剂盒进行LAMP;观察LAMP反应溶液颜色变化,绿色表示检测为阳性,橙色表示检测为阴性。优点是:具有简便、快速、准确、廉价、可视等优点,可用于畜牧业生产单位筛查和检测羊副结核分支杆菌,对羊副结核病的净化与控制具有重要意义。CN107937574ACN107937574A权利要求书1/1页1.一种羊副结核分支杆菌的LAMP检测引物,包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF,其特征是:各引物序列具体如下:F3:5′-CCTAGACTCGCGGACTCTT-3′;B3:5′-CACGGGTCACGTAGAAACG-3′;FIP:5′-CGGGCATCGAAGATCGCTACCAATTGTGACGTACGGGCTAC-3′;BIP:5′-TGGTCGATATCGGAGCTCCTCTGTTCCATCGACAGCTCAGC-3′;LF:5′-CGAATGCGTTCTGCCCCA-3′。2.如权利要求1所述的LAMP检测引物在羊副结核分支杆菌的中的应用。3.一种羊副结核分支杆菌的LAMP检测试剂盒,其特征是:包含23μL检测溶液,所述的检测溶液包括:20mMTris·HCl、pH为8.8,10mMKCl,10mM(NH4)2SO4,0.1%Tween20,0.8M甜菜碱(betaine),8mMMgSO4,1.4mMdNTPeach,8UBstDNApolymerase,钙黄绿素指示剂1μL,引物加入量为:5pmol正向外引物F3和5pmol反向外引物B3,40pmol正向内引物FIP和40pmol反向内引物BIP,5pmol正向环引物LF,最后用ddH2O补足至23μL;其中各引物具体序列如下:F3:5′-CCTAGACTCGCGGACTCTT-3′;B3:5′-CACGGGTCACGTAGAAACG-3′;FIP:5′-CGGGCATCGAAGATCGCTACCAATTGTGACGTACGGGCTAC-3′;BIP:5′-TGGTCGATATCGGAGCTCCTCTGTTCCATCGACAGCTCAGC-3′;LF:5′-CGAATGCGTTCTGCCCCA-3′。4.根据权利要求3所述的羊副结核分支杆菌的LAMP检测试剂盒,其特征是:所述钙黄绿素指示剂1μL包含有0.5mM钙黄绿素和10mM氯化锰。5.如权利要求3所述的LAMP检测试剂盒在羊副结核分支杆菌的中的应用。6.根据权利要求5所述的羊副结核分支杆菌的LAMP检测试剂盒在羊副结核分支杆菌的中的应用,其特征是:包括提取待检微生物的DNA,以提取的DNA为模板,利用LAMP试剂盒进行LAMP;观察LAMP反应溶液颜色变化,绿色表示检测为阳性,存在羊副结核分支杆菌,橙色表示检测为阴性,不存在羊副结核分支杆菌。7.根据权利要求5所述的羊副结核分支杆菌的LAMP检测试剂盒在羊副结核分支杆菌的中的应用,其特征在于:提取待检微生物的DNA,取2μLDNA溶液,加入23μLLAMP试剂盒中的检测溶液进行LAMP,LAMP反应程序为:60℃~65℃,45min~55min,扩增产物进行颜色变化的观察。8.根据权利要求7所述的羊副结核分支杆菌的LAMP检测试剂盒在羊副结核分支杆菌的中的应用,其特征在于:LAMP扩增条件为:63℃恒温50min。2CN107937574A说明书1/7页羊副结核分支杆菌的LAMP检测引物及其LAMP检测试剂盒和LAMP检测方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域