用于莲藕源性成分检测的引物探针及方法和试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106701908A(43)申请公布日2017.05.24(21)申请号201510793760.7(22)申请日2015.11.18(71)申请人中国检验检疫科学研究院地址100176北京市朝阳区高碑店北路甲3号(72)发明人陈颖韩建勋黄文胜(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称用于莲藕源性成分检测的引物探针及方法和试剂盒(57)摘要本发明涉及用于莲藕源性成分检测的寡核苷酸引物与探针。本发明还涉及用于测定莲藕源性成分的实时荧光PCR检测方法，所述方法包括使用针对莲藕源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针。本发明还涉及用于快速检测莲藕源性成分的实时荧光PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括用于实时荧光PCR检测莲藕源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针。本发明还涉及针对莲藕源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针在检测莲藕源性成分中的应用。使用本发明的实时荧光PCR检测方法和试剂盒，能够特异、灵敏、准确地测定藕粉等样品中是否含有莲藕源性成分。CN106701908ACN106701908A权利要求书1/1页1.用于实时荧光PCR方法检测样品中莲藕源性成分的特异性寡核苷酸引物对和探针组合物，其中所述引物对为Lotusroot-F：CCATGGAAGGGTGCATAATC，所述下游引物为Lotusroot-R：GAGATATCCGTTGCCGAGAG；所述探针为Lotusroot：ATTGTTGGGTGTTTTGCCTC。2.根据权利要求1所述的组合物，其中在探针的3’端连接有一个荧光淬灭基团TAMAR，5’端连接有一个荧光报告基团FAM。3.通过实时荧光PCR方法检测莲藕源性成分的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1-2所述的引物探针组合物和使用说明书。4.准确检测莲藕源性成分的实时荧光PCR方法，所述方法包括使用权利要求1-2所述的引物探针组合物和权利要求3所述的试剂盒。5.权利要求1-2所述的引物探针组合物和权利要求3所述的试剂盒在检测藕粉、莲藕汁等样品中莲藕源性成分的应用。2CN106701908A说明书1/6页用于莲藕源性成分检测的引物探针及方法和试剂盒技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体而言，本发明涉及用于莲藕源性成分检测的寡核苷酸引物和探针，用于测定莲藕源性成分的实时荧光PCR检测方法，用于快速检测莲藕源性成分的实时荧光PCR检测试剂盒以及莲藕源性成分的特异性寡核苷酸引物和探针在检测莲藕源性成分中的应用。。背景技术[0002]莲藕(Nelumbonucifera)为睡莲科莲属多年生大型水生草本植物，原产中国和印度，历史悠久，种质资源丰富。由于莲藕富含碳水化合物、蛋白质、维生素、矿物质、鞣质等，以莲藕为原料的藕粉及果汁等产品深受国内外消费者喜爱和食品研究者的关注。[0003]然而，为牟取利益，有些不法分子在藕粉产品中掺杂玉米、小麦、马铃薯、红薯和木薯等其他廉价的可食用淀粉。这些掺假行为，大多可利用扫描电镜法通过不同淀粉颗粒的超微形貌特性进行鉴别，但该方法无法对掺假藕粉中的木薯淀粉或甘薯淀粉进行鉴别，因为藕粉中除长棒形的典型藕粉颗粒外，还有一些小的不成熟的类似于球体碎块、半球体或大半个球体的小型藕粉颗粒，这些颗粒与木薯淀粉和红薯淀粉颗粒在超微形貌上极其相似。另外国家标准GB/T25733-2010《藕粉》中采用光学显微镜和偏光显微镜等检测手段判定藕粉，并将藕粉分级。但此法只能鉴别出类似于典型藕粉颗粒的淀粉颗粒，却无法确定这些长棒形颗粒是真的典型藕粉颗粒，还是马铃薯或芭蕉芋等其他大型淀粉颗粒。另外也有研究通过差示扫描量热仪对藕粉等常见几种淀粉的糊化过程进行比较，发现藕粉与其他淀粉在糊化吸热峰上有明显的差别，基于此也可将藕粉与其他淀粉进行区分。[0004]分子生物学技术的发展，弥补了常规化学检测技术的诸多不足，通过鉴定物种品种DNA水平上的差异来鉴定品种真实性和纯度，具有准确可靠、成本较低、不受环境因素影响，便于实现鉴定自动化，且可鉴定表型上难于鉴别的品种等。近几年来，实时荧光PCR技术已经广泛应用于肉类、水产品、奶制品等食品真实属性鉴别、食源性过敏原监测、转基因食品检测、食源性微生物筛查等领域。另外在谷物鉴别中也有所应用，如采用实时荧光PCR方法可准确鉴别小麦、大麦、燕麦及黑麦，检测灵敏度可达0.01%。[0005]目前，国内外尚未见报道能够快速、简便、特异且灵敏地检测藕粉等样品中莲藕源性成分的方法和试剂盒。[0006]因此，本领域需要一种快速、特异性好、灵敏度高的莲藕源性成分的检测方法，进行藕粉等样品中莲藕源性成分的检测。发明内容[0007]本发明的一个目