一种骨髓间充质干细胞的冻存保护液及冻存方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105850979A(43)申请公布日2016.08.17(21)申请号201610143829.6(22)申请日2016.03.14(71)申请人广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司地址510000广东省广州市国际生物岛螺旋四路一号生产区第五层502单元(72)发明人葛啸虎陈海佳王一飞冯德龙张维敏(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图4页(54)发明名称一种骨髓间充质干细胞的冻存保护液及冻存方法(57)摘要本发明涉及干细胞领域，公开了骨髓间充质干细胞的冻存保护液及冻存方法。本发明所述骨髓间充质干细胞的冻存保护液包括10v/v％DMSO、50v/v％骨髓间充质干细胞条件培养基、40v/v％胎牛血清。与常规细胞冻存液相比，采用本发明所述骨髓间充质干细胞的冻存保护液冻存后复苏，细胞回收率明显高于其他常规冻存液，可以用于骨髓间充质干细胞的长期保存及应用。本发明所述骨髓间充质干细胞的冻存方法将骨髓间充质干细胞消化离心后，去上清，FBS重悬细胞沉淀，加入所述冻存保护液后冻存细胞。与常规的冻存方法相比，本发明骨髓间充质干细胞的冻存方法冻存的细胞复苏后细胞回收率明显高于其他常规方法。CN105850979ACN105850979A权利要求书1/1页1.一种骨髓间充质干细胞的冻存保护液，其特征在于，包括DMSO10v/v％骨髓间充质干细胞条件培养基50v/v％胎牛血清40v/v％。2.根据权利要求1所述的冻存保护液，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞条件培养基的制备方法为：取骨髓间充质干细胞接种含FBS的DMEM/F12的培养基培养后，收集培养上清，离心后取上清。3.根据权利要求2所述的冻存保护液，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞条件培养基的制备方法中所述接种具体为向按照(5-10)×103/cm2细胞密度接种。4.根据权利要求2所述的冻存保护液，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞条件培养基的制备方法中所述含FBS的DMEM/F12的培养基中FBS的含量为10v/v％。5.根据权利要求2所述的冻存保护液，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞条件培养基的制备方法中所述培养具体为培养至细胞汇合度达到80％-90％。6.根据权利要求2所述的冻存保护液，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞条件培养基的制备方法中所述离心为1000rpm-2000rpm离心5min-10min。7.权利要求1所述骨髓间充质干细胞的冻存保护液的制备方法，其特征在于，按比例将骨髓间充质干细胞条件培养基与胎牛血清混合，然后加入DMSO。8.一种骨髓间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，将骨髓间充质干细胞消化离心后，去上清，FBS重悬细胞沉淀，加入权利要求1所述骨髓间充质干细胞的冻存保护液，混匀后，分装至冻存管中，-80℃中冻存过夜后，转移至液氮中长久保存。9.根据权利要求7所述的冻存方法，其特征在于，所述消化为向细胞中加入0.2％的胰酶消化1min-3min，用骨髓间充质干细胞生长培养基终止酶解；所述离心为1000rpm-1500rpm离心5-10min；所述骨髓间充质干细胞的冻存保护液的加入量为每(1-2)×106细胞加入1mL所述骨髓间充质干细胞的冻存保护液。10.一种骨髓间充质干细胞的冻存试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述骨髓间充质干细胞的冻存保护液。2CN105850979A说明书1/5页一种骨髓间充质干细胞的冻存保护液及冻存方法技术领域[0001]本发明涉及干细胞领域，具体涉及一种骨髓间充质干细胞的冻存保护液及冻存方法。背景技术[0002]干细胞(stemcell)是一类具有自我复制能力(self-renewal)的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。间充质干细胞(Mesenchymalstemcells，MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC具有自我复制、自我更新、多方向分化潜能、造血支持以及免疫调控等特性。在特定的机体外分化环境下，能够诱导分化为神经、心脏、骨、软骨、脂肪、上皮等多种组织细胞，被认为是细胞治疗技术的最有希望的来源细胞之一。除此以外，间充质干细胞能分泌多种营养物质，包括血管内皮生长因子(vEGF)、胎盘生长因子(PGF)、成纤维细胞生长因子(FGFs)、血小板源生长因子(PDGF)、转化生长因子(TGF-β)、肝细胞生长因子(HGF)等在内的各种生长因子，这些生长因子可参与多种细胞反应，促进细胞生长，而收集条件培养基是获得这些活性成分的有效方法。[0003]骨髓间充质干细胞是来源于骨髓来源的间充质干细胞，骨髓间充质干细胞具有