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本发明公开了一种脂肪间充质干细胞冻存保护液,包括基础培养基和添加在培养基中的以下成分:甘油、普鲁卡因微囊、香柑内酯、白藜芦醇、维生素C、胰岛素;各成分在培养基中的终浓度为:甘油20?30μg/mL、普鲁卡因微囊1?5ng/mL、香柑内酯3?8ng/mL、白藜芦醇5?10μg/mL、维生素C1?2mg/mL、胰岛素0.5?1mg/mL。本发明提供的保护液中添加普鲁卡因微囊、香柑内酯、白藜芦醇等成分,减少细胞经冻存后的损伤,提高细胞的存活率,经冻存后的细胞仍具有较好的增殖活性,保存液中各成分安全稳定,有助于细胞的长期保存。本发明还提供一种脂肪间充质干细胞的冻存方法,提高了细胞的保存效率,充分保证了脂肪间充质干细胞在各领域的应用。