一种从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106008703A(43)申请公布日2016.10.12(21)申请号201610526579.4C07K1/18(2006.01)(22)申请日2016.07.06(71)申请人方雅悯地址311121浙江省杭州市文一西路1500号未来科技城科创中心6号楼5单元7楼701申请人方存林(72)发明人方雅悯陈新凯方存林(74)专利代理机构东营双桥专利代理有限责任公司37107代理人侯玉山(51)Int.Cl.C07K14/79(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法(57)摘要一种从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，包括如下步骤：第1步，使用阳离子交换树脂对牛乳中的乳铁蛋白进行吸附、解附；第2步，对第1步得到的解附液进行浓缩；第3步，第2步得到的浓缩液采用不溶性Fe3+螯合树脂对Fe3+进行吸附，再对浓缩液进行浓缩。本方法能够降低乳铁蛋白中Fe3+离子含量，使铁饱和度降低至5-8%，明显提高乳铁蛋白的抗菌活性和产品品质的标准化与一致性；通过调整Fe3+螯合树脂吸附的时间、搅拌速度以及媒介的浓度、pH，可以对乳铁蛋白中铁的饱和度进行控制，满足不同产品功能对乳铁蛋白饱和度的要求。CN106008703ACN106008703A权利要求书1/1页1.一种从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：第1步，使用阳离子交换树脂对牛乳中的乳铁蛋白进行吸附、解附；第2步，对第1步得到的解附液进行浓缩；第3步，第2步得到的浓缩液采用不溶性Fe3+螯合树脂进行吸附，再对浓缩液进行浓缩。2.根据权利要求1所述的从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第1步中，解附过程是采用二级解附，第一级解附是采用1～2.5%的盐溶液解附，解附液是乳过氧化物酶蛋白，另用；第二级解附是采用3.5～7%的盐溶液解附，解附液送入第2步处理；所述的盐溶液是指钠盐、钾盐或者钙盐溶液。3.根据权利要求1所述的从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第2步中，采用分离膜对解附液进行浓缩；所述的分离膜是截留分子量在1000～50K的超滤膜。4.根据权利要求1所述的从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第3步中，不溶性Fe3+螯合树脂是指D403螯合树脂。5.根据权利要求1所述的从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第3步中，吸附操作时需要在浓缩液中加入醋酸、醋酸盐以及枸橼酸盐，配制其吸附环境中枸橼酸盐浓度为0.1mol/L~1.0mol/L,并调节pH至4.0～6.7。6.根据权利要求1所述的从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第3步中，树脂的吸附时间10～150分钟，吸附时搅拌桨转速速率为10～150rpm，吸附温度在3～30℃。7.根据权利要求1所述的从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第2步得到的浓缩液在送入第3步之前，可再经过一次弱酸型阳离子树脂的吸附、解附和超滤膜的浓缩处理；所述的弱酸型阳离子树脂是指CM树脂。8.根据权利要求1所述的从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第3步中，采用分离膜对浓缩液进行浓缩；所述的分离膜是截留分子量在1000～50K的超滤膜。9.根据权利要求1所述的从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述第1步中，阳离子交换树脂的制备步骤为：第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体PS-acyl-Cl，加入60ml四氢呋喃溶胀12h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比PS-acyl-Cl：乙二胺：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺3g、丙烯酸双环戊烯基酯、K2CO35g、四丁基溴化铵12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。10.根据权利要求1所述的牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，所述牛乳可以是鲜牛乳