牛乳铁蛋白肽及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102993296A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102993296A(43)申请公布日2013.03.27(21)申请号201110272178.8(22)申请日2011.09.14(71)申请人广州格拉姆生物科技有限公司地址510000广东省广州市萝岗区科学城科汇发展中心(自编A-5栋602房)(72)发明人夏新界李圣翔(51)Int.Cl.C07K14/79(2006.01)C07K1/22(2006.01)C12N15/12(2006.01)C12N15/63(2006.01)C12N1/21(2006.01)C12R1/19(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书55页页序列表序列表11页页(54)发明名称牛乳铁蛋白肽及其制备方法(57)摘要本发明涉及牛乳铁蛋白肽及其制备方法，牛乳铁蛋白肽(BovineLactoferricin，简写为LfcinB)是经胃蛋白酶从牛乳铁蛋白(bLF)N-端(17～41)水解的25个氨基酸残基，分子量约为3.1kd；其制备方法包括：1)重组表达载体的构建；2)诱导表达融合蛋白；3)蛋白质的分离与纯化。本发明的有益效果为：LfcinB是所有Lfcin中活性最高的，抑菌效果是牛乳铁蛋白400倍，能在胃肠道中发挥更重要的作用。CN102936ACN102993296A权利要求书1/1页1.一种牛乳铁蛋白肽，其特征在于，该牛乳铁蛋白肽的核苷酸序列为：GCTCCAAGAAAGAACGTTAGATGGTGTACTATTTCTCAACCAGAATGGTTTAAGTGTAGAAGATGGCAATGGAGAATGAAGAAGTTGGGTGCTCCATCTATTACTTGTGTTAGAAGAGCTTTCGCTTTGGAATGTATTAGAGCTATTGCTGAGAAGAAGGCTGATGCTGTTACTTTGGATGGTGGTATGGTTTTCGAAGCTGGTAGAGATCCATACAAGTTGAGACCAGTTGCTGCTGAAATTTACGGTACTAAGGAATCTCCACAAACTCATTACTACGCTGTTGCTGTTGTTAAGAAGGGTTCTAACTTTCAATTGGATCAATTGCAAGGTAGAAAGTCTTGTCATACTGGTTTGGGTAGATT该牛乳铁蛋白肽的氨基酸序列为：aprknvrwctisqpewfkcrrwqwrmkklgapsitcvrrafaleciraiaekkadavtldggmvfeagrdpyklrpvaaeiygtkespqthyyavavvkkgsnfqldqlqgrkschtglgr。2.根据权利要求1所述的牛乳铁蛋白肽，其特征在于，所述牛乳铁蛋白肽核苷酸序列的活性中心为：TTTAAGTGTAGAAGATGGCAATGGAGAATGAAGAAGTTGGGTGCTCCATCTATTACTTGTGTTAGAAGAGCTTTC该牛乳铁蛋白肽氨基酸序列的活性中心为：fkcrrwqwrmkklgapsitcvrraf。3.权利要求1或2所述的牛乳铁蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)重组表达载体的构建；2)诱导表达融合蛋白；3)蛋白质的分离与纯化。4.根据权利要求3所述的牛乳铁蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1)包括：牛乳铁蛋白肽基因的合成；牛乳铁蛋白肽基因的克隆；构建重组表达载体。5.根据权利要求4所述的牛乳铁蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述步骤2)包括：含牛乳铁蛋白肽基因的工程菌的获得；诱导表达融合蛋白。6.根据权利要求5所述的牛乳铁蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述步骤3)包括：融合蛋白的分离；融合蛋白的浓缩；融合蛋白的纯化；牛乳铁蛋白肽的保存。2CN102993296A说明书1/5页牛乳铁蛋白肽及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及牛乳铁蛋白肽及其制备方法。背景技术[0002]抗生素作为抗菌和促生长添加剂在动物饲料中使用已经有很长的历史，但随着人们认识水平的提高，抗生素在动物饲料中的广泛使用暴露出越来越多的负面作用，其中最为严重的，一是能造成畜禽产品中的药物残留，直接影响消费者的身体健康；二是严重影响动物消化道的微生态平衡，造成一些病原菌耐药性的发生，使得针对由这些病原菌所引起的感染的预防和治疗变得非常困难。目前，细菌抗药性问题普遍存在，而且耐药菌株的数量也显著增加，一些原来威胁人类生命的疾病，比如肺结核等，重又开始大范围发生。丹麦是最早禁止在饲料中使用抗生素的国家，从1994年开始，逐步减少抗生素在饲料中的使用。2003年，世界卫生组织(WHO)建议按照丹麦的模式逐步减少抗生素的使用。2006年，欧盟已经全面禁止抗生素在动物饲